肺栓塞栓子栓塞法动物模型制备
【造模机制】在外周血管中形成血栓,让栓子通过血液流动到达肺动脉,阻塞肺动脉,形成栓塞。
【造模方法】
1.Nowak法 动物麻醉后,游离出一侧颈静脉和一侧颈总动脉,动脉插管和静脉插管,其中,动脉插管和静脉插管用三通管相连,三通管另一端与1ml注射器相连,注射器内吸取有0.6ml凝血酶(10NIH凝血酶U/ml),开启动脉插管和注射器之间的通道,使血液流入注射器内1ml,关闭该通道,取下注射器振摇数次,使凝血酶和血液充分混匀,然后将凝血酶处理后的血液再通过三通管注入颈静脉。注意此时一定要夹闭颈静脉10分钟,待血栓形成后,移去静脉夹,释放栓子,栓子随血液流动到达肺动脉,即可形成肺栓塞模型。
2.碘标记法(Lodogen法) 常用I标记纤维蛋白原后,再把含有125I的纤维蛋白原和凝血酶混合,制成125I标记的血凝块,然后注入动物体内,标记常用Lodogen法。具体步骤如下:取Lodogen液,用三氯甲烷溶解,室温下氮气吹干制成反应管,加入纤维蛋白溶液,立即加入Na125I 11.1×10Bq,充分振荡混匀,标记反应混合物加至凝胶柱层析脱碘,
磷酸缓冲液洗脱。留取标记纤维蛋白原峰洗脱液,-20℃保存备用,控制放射性比活度在2.78×10Bq/ mg左右确保纤维蛋白原有良好的凝血酶活性。然后在枸橼酸钠抗凝新鲜人全血中顺序加入125I纤维蛋白原、CaCl2和人凝血酶,混合液用聚乙烯管迅速抽吸混匀,37℃温育20分钟在管内形成条状125I血栓,转移至三角烧瓶用生理盐水振荡漂洗。漂洗后将125I血栓切成等长小条,分别测量和记录放射性。
【模型特点】由于家兔的体型适中,价格不高,饲养方便,繁殖率与成活率高,性情温顺;家兔的纤溶系统比其他实验动物更接近于人体纤溶系统,故家兔肺栓塞是目前最为成熟和普遍,也是最为理想的动物模型。
犬的肺栓塞模型注入栓子后肺动脉平均压和肺血管阻力可以恒定地维持在高水平达4小时而不降低,在对该模型溶栓后肺动脉平均压和肺血管阻力30分钟后即开始显著下降,符合肺栓塞患者的临床表现,是极为理想的模型。而且,犬的血容量丰富,能耐受多次抽血化验,可避免单纯抽血引起的循环系统变化。
【模型评估和应用】由于该法主要是在体外形成血栓注入体内,所以相对于人体在形成肺栓塞时常有高凝状态,凝血机制失衡引起,该模型没有体现出机体的高凝状态,故仍有不足之处。如果用犬来制作该模型,犬的个体较大,性格生猛,对陌生实验人员攻击性强,具有一定危险性,且价格较为昂贵,多用于操作较为复杂的研究。