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琼脂糖凝胶电泳
2016年02月04日
来源:生物帮
作者:生物帮
责任编辑:wlladmin
摘要:琼脂糖凝胶电泳
制备 1 %琼脂糖凝胶:
(1) 称取0.7g(0.5g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70ml(50ml) 1×TAE,瓶口倒扣小烧杯。微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液(一般大胶用70ml,小胶用
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50ml) 。
(2) 胶板制备
取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净、晾干,放入制胶玻璃板。取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子。将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子。将冷却到 65℃ 左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止。
(3) 上样
在点样板或 parafilm 上混合 DNA 样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于 1X 。用 10 ul 微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面。(注意:加样前要先记下加样的顺序)。
(4) 电泳
加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压 60 - 100V ,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动。电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低。当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时,停止电泳。
(5) 检测
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电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5ug/ml 的溴化乙锭1×TAE 溶液染色约20min,再用清水漂洗10min。观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存。
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