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细胞的冻存与复苏方法及步骤
2016年02月18日
来源：生物帮
作者：生物帮
责任编辑：wlladmin
摘要：细胞的冻存与复苏方法及步骤
细胞的冻存
(1) 消化细胞(同实验二)，将细胞悬液收集至离心管中。
(2) 1000rpm离心10分钟，弃上清液。
(3) 沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。
(4) 将悬液分至冻存管中，每管1 ml。
(5) 将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
(6) 贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
(7) 按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
2.13.2 细胞的复苏
(1) 准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯37℃的温水。
(2) 从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。
(3) 打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。
(4) 1000rpm离心10分钟，弃去上清液。
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(5) 沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。
(6) 加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。
