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菌种沙土保藏法
2016年02月18日
来源：生物帮
作者：生物帮
责任编辑：wlladmin
摘要：菌种沙土保藏法
(1) 取河沙加入10%稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。
(2) 倒去酸水，用自来水冲洗至中性。
(3) 烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
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(4) 另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
(5) 烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。
(6) 按一份黄土、三份沙的比例(或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土)掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。
(7) 抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
(8) 选择培养成熟的(一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好)优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。
(9) 于每支沙土管中加入约0.5ml(一般以刚刚使沙土润湿为宜)孢子悬液，以接种针拌匀。
(10) 放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。
(11) 每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
(12) 若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。
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(13) 需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。
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