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酶切
2016年02月22日
来源:生物帮
作者:生物帮
责任编辑:wlladmin
摘要:酶切
(1) 反应体系的建立:
a.在一无菌1.5mlEppendorf管中加入:
无菌双蒸水7μl10×酶切缓冲液2μl
116
质粒DNA(100ng/μl)10μl
EcoRⅠ(5U/μl)1μl总体积为20μl
b.轻轻混匀,12000rpm离心5sec。
(2) 37℃水浴1h。
(3) 将Eppendorf管置65℃水浴中10min,通过加热使酶失活以终止反应。
(4) 12000rpm离心5sec,将管盖及管壁上的水离下。
(5) 取10μl消化产物,与2μl6×上样缓冲液混匀,琼脂糖凝胶电泳检测消化效果,电泳条件:约100V30~60min。
(6) 结果观察。
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