欢迎您推荐或发布相关实验技术、实验攻略、实验经验分享等。
胶回收
2016年02月22日
来源：生物帮
作者：生物帮
责任编辑：wlladmin
摘要：胶回收
2.19.1 试剂盒法
(1) 从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)；
(2) 凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)；
(3) 凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,
117
混匀；
(4) 将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒；
(5) 取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟；
(6) 重复步骤5一次；
(7) 取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟；
(8) 将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟；
(9) 盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段。
2.19.2 冻融，挤压回收法
(1) 用手术刀在DNA紫外检测仪下切割下含有所要DNA片段的凝胶块置于Eppendorf管中,甩至管底,-20℃冻存30min；
(2) 取出后用牙签将凝胶块尽量捣碎,剪去管上部,用烧红的针头在管底扎几个微孔,孔径越细越好；
(3) 将管套入另一个Eppendorf管中,常温下,15 000rpm离心10分钟；
(4) 将上清液吸到收集管中,向沉淀中加入100μl重蒸水；
(5) 重复步骤(2),(3),(4)两遍(如图所示)；
118
(6) 收集的上清于15 000rpm,4℃离心20分钟,吸取上清液,补足400μl；
(7) 收集的上清液加入0.1V 的KAc(pH=5.5,3M)和2.0～2.5V 的无水乙醇,充分混匀后-20℃放置30min,取出15 000rpm,4℃离心30min；
(8) 弃上清,加入400μl 70%的乙醇,15 000rpm,4℃离心5min；
(9) 弃上清并倒扣3~5min,然后37℃烘干(30min左右即可)；
(10) 烘干沉淀可用30ml ddH2O溶解,待用。
上一篇：酶切[ 02-22 ]
下一篇：正确的细胞复苏需知事项[ 02-23 ]
相关文章
- 没有相关内容！
