RSS订阅

信息发布

您现在的位置:首页

真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

2016年03月07日 浏览量: 评论(0) 来源:南方医院大学学报 2015年第03期 作者:王小军 张浩 郑杰 庞坚 曹月龙 詹红生 丁道芳 责任编辑:admin
摘要:在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。

目的:在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。

方法:取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1 代细胞进行实验。扩增人Wnt7b 基因及克隆至PCDH-GFP 上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b 至293ft 细胞中,48 h 后收集细胞上清及转染细胞,Western blot 鉴定Wnt7b 在293ft 细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞,24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。

结果:成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后,软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形,Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调,Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降,ColⅩ和ADAMTS5表达增强。

结论:有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变,建立软骨细胞退变的体外模型。

 

全文阅读:真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

对不起,暂无资料。
点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息
Baidu
map