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实验攻略

小鼠排卵控制

2016年03月14日 浏览量: 评论(0) 来源:《基因修饰小鼠制备常用技术》 作者:王超主编 责任编辑:wlladmin
摘要:小鼠排卵控制

小鼠排卵(ovulation)控制分为排卵时间控制与排卵数量控制。其中,排卵时间控制的目的是得到特定发育阶段的卵母细胞,如原核注射法转基因使用的原核胚,病毒感染法使用的着床前胚胎。排卵数量控制又称超数排卵(multiple ovulation),目的是为了获得更多的卵母细胞。超数排卵模拟了体内卵母细胞发育、成熟与排放的激素调节模式,通过注射不同的促性腺激素,刺激暂时处于休止状态的卵母细胞进入成熟发育期,成熟后排入于输卵管。由此可以获得比自然排卵时更多的卵母细胞或胚胎。在体外受精、胚胎体外冷冻保存、基因修饰动物和克隆动物的实验操作中都需要大量的卵细胞,而动物正常的排卵量是有限的,所以超数排卵技术显得实用而重要。

目前在控制小鼠排卵中常用的激素有促进卵泡发育的促卵泡素(follicular stimulating hormone,FSH)和促进排卵的促黄体素(luteinizing hormone,LH)及其各自比较经济的替代物孕马血清(pregnant mare serum gonadotrophin / equine chorionic gonadotrophin,PMSG/eCG)和人血绒毛膜促性腺素(human chorionic gonadotrophin, hCG)。

小鼠的发情没有季节性限制,主要受环境影响,尤其是光照控制。小鼠排卵多在暗周期的中点。因此,常用皮下或腹腔注射PMSG 5~10 IU,48~50 h后皮下或腹腔注射相同剂量的hCG。注射hCG后的母鼠即与公鼠合笼,并于第二天早上10时前检查母鼠是否有阴道栓,如见到栓则说明已交配过,计作怀孕0 d。通过超排实验,曾有1只昆明小鼠获得83枚胚胎、1只长爪沙鼠获得42枚,1只金黄地鼠获得72枚胚胎以及1只兔子获得88枚胚胎的记录,由此可见,超排的效果确实可观。

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