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ELISA常见问题及分析
2016年03月14日
来源：生物帮
作者：生物帮
责任编辑：wlladmin
摘要：ELISA常见问题及分析
ELISA操作是需要非常细心的工作。操作者在进行ELISA前应该对实验
有充分的了解，并对预期结果十分清楚。实验室ELISA 失败的原因有10%左
右是由于水质量引起的，另外90%则是操作上的失误引起的，包括未意识到的
操作失误，或者明知操作原则但想偷懒而未按正确要求操作。另外还有少量失
败案例是由于设备的管理不当或设备状况太差引起的。ELISA常见问题以分析
本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自Proteintech Group.
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对策总结如下：
显色极浅或不显色
（1） 底物漏加成份、底物失效、底物配制浓度计算错误；
（2） 整个ELISA过程中存在抗原或抗体不匹配；
（3） 整个ELISA过程中样品稀释过度；
（4） 稀释体系错误。如使用含蛋白成份的试剂进行包被。
全板阳性
（1） 酶标抗原或抗体浓度过高，尝试降低浓度；
（2） 使用的封闭试剂不正确，或者未封闭；
（3） 酶标抗原或抗体与体系中其它试剂有结合；
（4） 底物被酶标抗原或抗体污染。
不均匀显色
（1） 酶标板质量问题，重新检测酶标板均一性。
（2） 包被或加样过程中有部份孔漏加、少加等情况，可能是操作者不细心，
也可能是移液器漏气；
（3） 加样时移液器打入太多气泡；
（4） 选购的酶标板不正确，可能误选其它用途的板子；
（5） 温育过程中板子叠放过厚；
（6） 加样或稀释过程中试剂没有充份混匀，或稀释梯度计算错误；
（7） 洗板失误，部份孔未加洗涤液或洗涤液加入去垢剂后未充分混匀，或
洗涤过程中带入气泡。
显色过快
（1） 酶标抗原或抗体浓度过高；
（2） 某一试剂浓度过高。
显色过慢
（1） 酶标抗原或抗体浓度过底，或者标记效率低，或者标记后免疫活性受
影响；
（2） 试剂被污染，如HRP酶标记的抗原或抗体被叠氮钠污染；
（3） 反应温度过低；
本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自Proteintech Group.
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（4） 底物缓冲液pH不正确；
背景深
（1） 酶标抗原或抗体浓度过高；
（2） 抗体的非特异性结合；
（3） 抗原或抗体不纯；
（4） 二抗的种属交叉识别；
