一、引言

本附录的内容不一定满足或适用于特定的实验室或特定的实验室活动，应根据各实验室的风险评估结果制定适用的良好操作规程。

 

二、标准操作指南

(1)建立并执行准入制度。所有进入人员要知道实验室的潜在危险，符合实验室的进入规定。

(2)确保实验室人员在工作地点可随时得到生物安全手册。

(3)建立良好的内务规程。对个人日常清洁和消毒进行要求，如洗手、淋浴(适用时)等。

(4)规范个人行为。在实验室工作区不要饮食、抽烟、处理隐形眼镜、使用化妆品、存放食品等；工作前，掌握生物安全实验室标准的良好操作规程。

(5)正确使用适当的个体防护装备，如手套、护目镜、防护服、口罩、帽子、鞋等。个体防护装备在工作中发生污染时，要更换后才能继续工作。

(6)戴手套工作。每当污染、破损或戴一定时间后，更换手套；每当操作危险性材料的工作结束时，除去手套并洗手；离开实验间前，除去手套并洗手。严格遵守洗手的规程。不要清洗或重复使用一次性手套。

(7)如果有可能发生微生物或其他有害物质溅出，要佩戴防护眼镜。

(8)存在空气传播的风险时需要进行呼吸防护，用于呼吸防护的口罩在使用前要进行适配性试验。

(9)工作时穿防护服。在处理生物危险材料时，穿着适用的指定防护服。离开实验室前按程序脱下防护服。用完的防护服要消毒灭菌后再洗涤。工作用鞋要防水、防滑、耐扎、舒适，可有效保护脚部。

(10)安全使用移液管，要使用机械移液装置。

(11)配备降低锐器损伤风险的装置和建立操作规程。在使用锐器时要注意：

——不要试图弯曲、截断、破坏针头等锐器，不要试图从一次性注射器上取下针头或套上针头护套；必要时，使用专用的工具操作；

——使用过的锐器要置于专用的耐扎容器中，不要超过规定的盛放容量；

——重复利用的锐器要置于专用的耐扎容器中，采用适当的方式消毒灭菌和清洁处理；

——不要试图直接用手处理打破的玻璃器具等，尽量避免使用易碎的器具。

(12)按规程小心操作，避免发生溢洒或产生气溶胶，如不正确的离心操作、移液操作等。

(13)在生物安全柜或相当的安全隔离装置中进行所有可能产生感染性气溶胶或飞溅物的操作。

(14)工作结束或发生危险材料溢洒后，要及时使用适当的消毒灭菌剂对工作表面

和被污染处进行处理。

(15)定期清洁实验室设备。必要时使用消毒灭菌剂清洁实验室设备。

(16)不要在实验室内存放或养与工作无关的动植物。

(17)所有生物危险废物在处置前要可靠消毒灭菌。需要运出实验室进行消毒灭菌的材料，要置于专用的防漏容器中运送，运出实验室前要对容器进行表面消毒灭菌处理。

(18)从实验室内运走的危险材料，要按照国家和地方或主管部门的有关要求进行包装。

(19)在实验室入口处设置生物危险标识。

(20)采取有效的防昆虫和啮齿类动物的措施，如防虫纱网、挡鼠板等。

(21)对实验室人员进行上岗培训并评估与确认其能力。需要时，实验室人员要接受再培训，如长期未工作、操作规程或有关政策发生变化等。

(22)制定有关职业禁忌症、易感人群和监督个人健康状态的政策。必要时，为实验室人员提供免疫计划、医学咨询或指导。

 

三、特殊的操作指南

(1)经过有控制措施的安全门才能进入实验室，记录所有人员进出实验室的日期和时间并保留记录。

(2)定期采集和保存实验室人员的血清样本。

(3)只要可行，为实验室人员提供免疫计划、医学咨询或指导。

(4)正式上岗前实验室人员需要熟练掌握标准的和特殊的良好工作行为及微生物操作技术和操作规程。

(5)正确使用专用的个体防护装备，工作前先做培训、个体适配性测试和检查，如对面具、呼气防护装置、正压服等的适配性测试和检查。

(6)不要穿个人衣物和佩戴饰物进入实验室防护区，离开实验室前淋浴。用过的实验防护服按污染物处理，先消毒灭菌再洗涤。

(7)Ⅲ级生物安全柜的手套和正压服的手套有破损的风险，为了防止意外感染事件，需要另戴手套。

(8)定期消毒灭菌实验室设备。仪器设备在修理、维护或从实验室内移出以前，要进行消毒灭菌处理。消毒人员要接受专业的消毒灭菌培训，使用专用个体防护装备和消毒灭菌设备。

(9)如果发生可能引起人员暴露感染性物质的事件，要立即报告和进行风险评估，并按照实验室安全管理体系的规定采取适当的措施，包括医学评估、监护和治疗。

(10)在实验室内消毒灭菌所有的生物危险废物。

(11)如果需要从实验室内运出具有活性的生物危险材料，要按照国家和地方或主

管部门的有关要求进行包装，并对包装进行可靠的消毒灭菌，如采用浸泡、熏蒸等方式消毒灭菌。

(12)包装好的具有活性的生物危险物除非采用经确认有效的方法灭活后，不要在没有防护的条件下打开包装。如果发现包装有破损，立即报告，由专业人员处理。

(13)定期检查防护设施、防护设备、个体防护装备，特别是带生命支持系统的正压服。

(14)建立实验室人员就医或请假的报告和记录制度，评估是否与实验室工作相关。

(15)建立对怀疑或确认发生实验室获得性感染的人员进行隔离和医学处理的方案并保证必要的条件(如：隔离室等)。

(16)只将必需的仪器装备运入实验室内。所有运入实验室的仪器装备，在修理、维护或从实验室内移出以前要彻底消毒灭菌，比如生物安全柜的内外表面以及所有被污染的风道、风扇及过滤器等均要采用经确认有效的方式进行消毒灭菌，并监测和评价消毒灭菌效果。

(17)利用双扉高压锅、传递窗、渡槽等传递物品。

(18)制定应急程序，包括可能的紧急事件和急救计划，并对所有相关人员培训和进行演习。

 

四、动物微生物实验室的良好操作指南

(1)适用时，执行标准或特殊的操作指南。

(2)实验前了解动物的习性，咨询动物专家并接受必要的动物操作的培训。

(3)开始工作前，实验人员(包括清洁人员、动物饲养人员、实验操作人员等)要接受足够的操作训练和演练，应熟练掌握相关的实验动物和微生物操作规程和操作技术，动物饲养人员和实验操作人员要有实验动物饲养或操作上岗合格证书。

(4)将实验动物饲养在可靠的专用笼具或防护装置内，如负压隔离饲养装置(需

要时排风要通过HEPA过滤器排出)等。

(5)考虑工作人员对动物的过敏性和恐惧心理。

(6)动物饲养室的入口处设置醒目的标识并实行严格的准入制度。包括物理门禁措施(如：个人密码和生物学识别技术等)。

(7)个体防护装备还要考虑方便操作和耐受动物的抓咬和防范分泌物喷射等，要使用专用的手套、面罩、护目镜、防水围裙、防水鞋等。

(8)操作动物时，要采用适当的保定方法或装置来限制动物的活动性，不要试图用人力强行制服动物。

(9)只要可能，限制使用针头、注射器或其他锐器，尽量使用替代的方案，如改变动物染毒途径等。

(10)操作灵长类和大型实验动物时，需要操作人员具有非常丰富的工作经验。

(11)时刻注意是否有逃出笼具的动物，濒临死亡的动物及时妥善处理。

(12)不要试图从事风险不可控的动物操作。

(13)在生物安全柜或相当的隔离装置内从事涉及产生气溶胶的操作，包括更换动物的垫料、清理排泄物等。如果不能在生物安全柜或相当的隔离装置内进行操作，要组合使用个体防护装备和其他的物理防护装置。

(14)选择适用于所操作动物的设施、设备、实验用具等，配备专用的设备消毒灭菌和清洗设备，培训专业的消毒灭菌和清洗人员。

(15)从事高致病性生物因子感染的动物实验活动，是极为专业和风险高的活动，实验人员应参加针对特定活动的专门培训和演练(包括完整的感染动物操作过程、清洁和消毒灭菌、处理意外事件等)，而且要定期评估实验人员的能力，包括管理层的能力。

(16)只要可能，尽量不使用动物。

 

五、微生物实验室的清洁

(1)由受过培训的专业人员按照专门的规程清洁实验室。外雇的保洁人员可以在实验室消毒灭菌后负责清洁地面和窗户(高级别生物安全实验室不适用)。

(2)保持工作表面的整洁。每天工作完后都要对工作表面进行清洁并消毒灭菌。宜使用可移动或悬挂式的台下柜，以便于对工作台下方进行清洁和消毒灭菌。

(3)定期清洁墙面，如果墙面有可见污物时，及时进行清洁和消毒灭菌。不宜无目的或强力清洗，避免破坏墙面。

(4)定期清洁易积尘的部位，不常用的物品最好存放在抽屉或箱柜内。

(5)清洁地面的时间视工作安排而定，不在日常工作时间做常规清洁工作。清洗地板最常用的工具是浸有清洁剂的湿拖把；家用型吸尘器不适于生物安全实验室使用；不要使用扫帚等扫地。

(6)可以用普通废物袋收集塑料或纸制品等非危险性废物。

(7)用专用的耐扎容器收集带针头的注射器、碎玻璃、刀片等锐利性废弃物。

(8)用专用的耐高压蒸汽消毒灭菌的塑料袋收集任何具有生物危险性或有潜在生物危险性的废物。

(9)根据废弃物的特点选用可靠的消毒灭菌方式，如是否包含基因改造生物、是否混有放射性等其他危险物、是否易形成胶状物堵塞灭菌器的排水孔等，要监测和评价消毒灭菌效果。

 

六、生物材料溢洒处理

1．概述

相关的工作人员应熟悉生物危险物质溢洒处理程序、溢洒处理工具包的使用方法和存放地点。实验动物机构应根据其常用的生物危险材料制定选用消毒剂和消毒方案。如果溢洒物中同时含有放射性物质或危险性化学物质，则应使用特殊的处理程序。

2．生物材料溢洒处理工具包

溢洒处理工具包的存放地点应有明确的指示。基础的溢洒处理工具包通常包括：

——对感染性物质有效的光谱消毒剂或指定的消毒剂，消毒剂需要按使用要求定期配制；

——消毒剂盛放容器；

——镊子或钳子、一次性刷子、可高压的扫帚和簸箕，或其他处理锐器的装置；

——足够的布巾、纸巾或其他适宜的吸收材料；

——用于盛放感染性溢洒物以及清理物品的专用收集袋或容器；

——橡胶手套；

——面部防护装备，如面罩、护目镜、一次性口罩等；

——溢洒处理警示标识，如“禁止进入”“生物危险”等；

——其他专用的工具。

3．撤离房间

发生生物危险物质溢洒时，立即通知房间内的无关人员迅速离开，并立即通知实验室主管人员。必要时，由实验室主管人员安排专人清除溢洒物。在撤离房间的过程中注意防护气溶胶，关门并张贴“禁止进入”“溢洒处理”的警告标识，至少30min后方可进入现场处理溢洒物。撤离人员按照离开实验室的程序脱去个体防护装备，用适当的消毒灭菌剂和水清洗所暴露皮肤。如果同时发生了针刺或扎伤，可以用消毒灭菌剂和水清洗受伤区域，挤压伤处周围以促使血往伤口外流；如果发生了黏膜暴露，至少用水冲洗暴露区域15 min；立即向主管人员报告。

4．溢洒区域的处理

(1)准备清理工具和物品，在穿着适当的个体防护装备(如：鞋、防护服、口罩、双层手套、护目镜、呼吸保护装置等)后进入实验室。需要两人共同处理溢洒物，必要时，还需配备一名现场指导人员。

(2)判断污染程度，用消毒灭菌剂浸湿的纸巾(或其他吸收材料)覆盖溢洒物，小心从外围向中心倾倒适当量的消毒灭菌剂，使其与溢洒物混合并作用一定的时间。应注意按消毒灭菌剂的说明确定使用浓度和作用时间。

(3)到作用时间后，小心将吸收了溢洒物的纸巾(或其他吸收材料)连同溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，并反复用新的纸巾(或其他吸收材料)将剩余物质吸净。破碎的玻璃或其他锐器要用镊子或钳子处理。用清洁剂或消毒灭菌剂清洁被污染的表面。所处理的溢洒物以及处理工具(包括收集锐器的镊子等)全部置于专用的收集袋或容器中并封好。

(4)用消毒灭菌剂擦拭可能被污染的区域。

(5)按程序脱去个体防护装备，将暴露部位向内折，置于专用的收集袋或容器中并封好。

(6)按程序洗手。

(7)按程序处理清除溢洒物过程中形成的所有废物。

5．生物安全柜内溢洒的处理

处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接面对前操作口，而应处于前视面板的后方。选择消毒灭菌剂时需要考虑其对生物安全柜的腐蚀性。如果溢洒的量不足1 mL时，可直接用消毒灭菌剂浸湿的纸巾(或其他材料)擦拭。如溢洒量大或容器破碎，建议按如下操作：

(1)使生物安全柜保持开启状态。

(2)在溢洒物上覆盖浸有消毒灭菌剂的吸收材料，作用一定时间以发挥消毒灭菌作用。必要时，用消毒灭菌剂浸泡工作表面以及排水沟和接液槽。

(3)在安全柜内对所戴手套消毒灭菌后，脱下手套。如果防护服已被污染，脱掉所污染的防护服后，用适当的消毒灭菌剂清洗暴露部位。

(4)穿好适当的个体防护装备，如双层手套、防护服、护目镜和呼吸保护装置等。

(5)小心将吸收了溢洒物的纸巾(或其他吸收材料)连同溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，并反复用新的纸巾(或其他吸收材料)将剩余物质吸净；破碎的玻璃或其他锐器要用镊子或钳子处理。

(6)用消毒灭菌剂擦拭或喷洒安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧；作用一定时间后，用洁净水擦干净消毒灭菌剂。

(7)如果需要浸泡接液槽，在清理接液槽前要先报告主管人员；可能需要用其他方式消毒灭菌后再进行清理。

(8)如果溢洒物流入生物安全柜内部，需要评估后采取适用的措施。

6．离心机内溢洒的处理

(1)在离心感染性物质时，要使用密封管以及密封的转子或安全桶。每次使用前，检查并确认所有密封圈都在位并状态良好。

(2)离心结束后，至少再等候5min打开离心机盖。

(3)如果打开盖子后发现离心机已经被污染，立即小心关上。如果离心期间发生离心管破碎，立即关机，不要打开盖子。切断离心机的电源，至少30min后开始清理工作。

(4)穿着适当的个体防护装备，准备好清理工具。必要时，清理人员需要佩戴呼吸保护装置。

(5)消毒灭菌后小心将转子转移到生物安全柜内，浸泡在适当的非腐蚀性消毒灭菌液内，建议浸泡60min以上。

(6)小心将离心管转移到专用的收集容器中。一定要用镊子夹取破碎物，可以用镊子夹着棉花收集细小的破碎物。

(7)通过用适当的消毒灭菌剂擦拭和喷雾的方式消毒灭菌离心转子仓室和其他可能被污染的部位，空气晾干。

(8)如果溢洒物流入离心机的内部，需要评估后采取适用的措施。

7．评估与报告

对溢洒处理过程和效果进行评估，必要时对实验室进行彻底的消毒灭菌处理和对暴露人员进行医学评估，并按程序记录相关过程和报告。