(一)设施启用前的净化操作

 新建(改建)和停用后新引入动物的饲养室或实验室在使用前按以下程序进行净化处理。

1．启动运行净化处理的顺序  开机+清扫清洁区+净水洗刷+洗涤剂洗刷+净水洗刷+关机+封闭通道口+喷雾消毒+启封各通道+换气24h消毒剂擦拭+封闭通道+熏蒸消毒+启封各通道+换气48h+检测沉降菌+结果(合格+启用，不合格+重复净化消毒)。

2．启用运行前仪器设备进入  将实验所需常规仪器、设备、笼架具、超净台等移入洁净区，对不耐腐蚀的仪器设备要进行保护。

3．启动前净化操作的具体步骤和要求

(1)启动送、排风机，调整好风量、气流速度、换气次数及压强梯度，设备稳定运行24h。

(2)清扫清洁区顺序：天花板+墙壁+笼架具+仪器设备+实验台+地面。

(3)清扫后用净水将地面、墙面、实验台擦洗3遍，再用中性洗涤剂洗刷，最后用净水擦洗干净。关闭送、排风机，封闭与外界相通的所有通道。

(4)操作人员穿戴好防护服，将配制好的消毒液装入喷雾器，进行喷雾。常用的喷雾剂为过氧乙酸，使用浓度为1％～2％，用量为10mL/立方米，喷雾后保持2～3h。

(5)操作人员穿戴好防护服，进入洁净区，解封各通道，送风换气24h。

(6)甲醛熏蒸。熏蒸程序与喷雾程序相同，熏蒸时操作人员必须穿戴好防护服和防毒面具，一般使用剂量为10％浓度的甲醛40mL/立方米中加入20g/立方米高锰酸钾。产生气体后，操作人员迅速退出并封闭门，保持24h以上作用时间。若采用加热法熏蒸，使用浓度为10％的甲醛25～50mL/m3作用24h以上。

(7)操作人员穿戴好无菌保护服，戴好无菌防毒面具进入洁净室，启封各通道口，开始送风换气2～3d，最后测定室内沉降菌。

(二)进出屏障环境设施的操作管理

1．工作人员  工作人员进入第一更衣室脱掉全部衣服，进入淋浴间淋浴10～30min。淋浴后将用过的毛巾拖鞋放在淋浴间，进入第二更衣室，用灭菌毛巾擦干身体，穿上已灭菌好的工作服，戴上帽、手套(头发不许外露)。在离开第二更衣室之前打开淋浴间内门，把用过的毛巾和包布放在淋浴间(这些物品由下一个进入淋浴间的人放入第一更衣室)，这时工作人员可以进入工作间。如果灭菌衣物需要补充，工作人员必须先去洁净间取灭菌过的衣物放在内更衣室，以便下次使用。

  2．实验动物  动物必须通过传递窗传入。传递动物时一个人在清洁间，另一个在外侧。在外侧的人确认传递窗对侧门关闭时，打开进口，把运输盒放进传递窗，然后用喷雾器喷75％乙醇或0.5％过氧乙酸，关闭进口并开启紫外灯，15～30min后由在清洁间的人打开内口，在传递窗内启开运输盒把动物移到预先准备好的灭菌饲育盒里。运输盒留在窗内，取出饲育盒关闭内口，把动物送入饲育室。动物传出时，工作人员在动物室把动物装入运输盒(要带过滤膜)，用胶带封好后放入传递窗或传递缓冲间，负责发动物的人从外面取走。

3．物品和用具

(1)灭菌柜的使用  清洁区使用的全部鼠盒、水瓶、水、饲料、垫料、衣服等耐热物品都必须经过双扉高压真空灭菌柜灭菌后方可进入清洁区。灭菌柜每次灭菌都必须进行安全测试，确保达到有效灭菌(用试纸法或培养法)。开启灭菌柜进口时必须在灭菌柜出口关闭状态下进行，相反在确认灭菌柜进口关闭状态下开启出口。操作人员必须在放入或取出柜内物品后随手关闭柜门。

(2)传递窗和渡槽的使用  不耐热类物品经过渡槽或传递窗进入清洁区。传递窗的使用方法同传递动物一样，只是物品摆放时要留表面空间，可用高强度紫外灯照射灭菌30min，使其充分消毒。耐酸、耐水的物品可经渡槽进入清洁区，渡槽内存放消毒药水的液面无论任何时候都不能低于隔离板。要经常检查药液并补充，槽内消毒液应定期更换。更换时先把清洁区一侧的盖封严，然后打开排水阀，水排完后把新配好的消毒水由外侧加入渡槽。使用时工作人员把物品由外间放入渡槽，然后由清洁区的工作人员戴橡胶手套取出。传渡的物品在槽内存放时间不少于30min。

（三)屏障环境设施操作管理规程

1．工作人员屏障环境设施(繁育)操作规程

(1)工作人员在休息室脱下饰物、换鞋、洗手。

(2)进入第一更衣室脱衣、换鞋。

(3)进入淋浴室，洗漱口腔，全身淋浴10～30min，然后在清洁区用消毒毛巾擦干身体。

(4)进入第二更衣室，穿无菌工作服，戴口罩及工作帽，穿工作鞋，戴工作手套。

(5)经缓冲间、风淋室，进入清洁走廊，然后到清洁准备区，把当天使用的东西装在运输车上一次推到饲育间或实验室。

(6)进入第一间饲养室工作，检查室内环境及动物一般情况。加灭菌饲料、饮水，更换消毒垫料，清除污物，打扫卫生，把污物及污染器具从后门放在污染走廊上。做好繁殖、育种、室内环境及动物情况的记录，特别是对异常情况及处理办法要认真记录。

(7)第一间工作完成从前门通过清洁走廊进入第二间，按第一间要求进行工作。这样依次完成，最后从工作间后门出去进入污染走廊。

(8)将污染走廊上的污物及污染器具带出，送清洗消毒间进行清洗消毒备用。

2．工作人员在洁净区内工作时注意事项

(1)途经所有的门都必须随开随关，不能有敞门现象。

(2)SPF动物每周更换垫料1～2次，室内消毒1次。用药水擦四壁、笼架、拖地，定期喷雾消毒。笼具每周消毒1～2次。

(3)保持准备室、浴室、走廊清洁无尘，每天用药水擦拭、拖地，定期用过氧乙酸喷雾消毒。紫外线灯管使用1000h要及时更换。

(4)隔月做一次沉降菌检查。每季度对动物做微生物检查，发现问题应及时采取措施。

(5)工作人员要做好下次进室的各项准备工作。

(6)工作人员感冒、腹泻及胃肠不适，或有真菌性皮肤病、外伤及发热等疾病时，不得进入清洁区工作。