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雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响
2016年04月27日
来源:南方医科大学学报 2016年第04期
作者:谭焱 王继业 易仁亮 邱健
责任编辑:admin
摘要:mTOR是细胞生长的中枢控制因子,在调节细胞生长与增殖方面起着关键作用且与细胞周期密切相关。既往研究提示CAVD的进展涉及一个积极的生物过程,而促进这种发展的分子机制与动脉粥样硬化相似,目前已有研究证实雷帕霉素具有抗动脉粥样硬化的作用,而其在钙化性主动脉瓣膜病的研究中鲜有报道;本课题组前期实验证实雷帕霉素通过抑制相关成骨蛋白活性从而抑制瓣膜间质细胞的钙化;本实验旨在观察雷帕霉素是否能够抑制瓣膜间质细胞增殖的活性,为进一步研究雷帕霉素在钙化性主动脉瓣膜病的研究提供理论基础。
目的:利用雷帕霉素靶向抑制mTOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。
方法:体外分离大鼠瓣膜间质细胞后 培养并鉴定;细胞随机分为两组:雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞 仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR 检测细胞中S6、P70S6K的mRNA表达水平;Western blotting 检测细胞中S6、 P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。
结果:体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于 加药组细胞(P<0.05),加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组 细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低(P<0.05)。
结论:雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过 改变细胞周期而是通过抑制mTOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。
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