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人IL-37b基因真核表达载体的构建与表达
2016年07月22日
来源：中国实验动物学报 2016年第3期
作者：姚静 程江 裴雪枫 王静宇 袁明
责任编辑：admin
摘要：本实验利用基因工程相关技术，从人外周血单个核细胞中成功克隆出IL－37b全长编码区序列，并构建了其真核表达载体，且成功在THP-1细胞中实现了过表达，为进一步研究IL－37的生物学功能奠定基础。
目的： 构建pEGFP-N1/IL-37b真核表达载体,并检测其在THP-1细胞中的表达情况。
方法：从人PBMCs中提取总RNA,利用RT-qPCR技术扩增出IL-37b基因编码区序列,克隆至pEGFP-N1真核表达载体,将构建的重组质粒pEGFP-N1/IL-37b转染到THP-1细胞中,通过RT-qPCR和Western blot检测IL-37的表达。
结果：双酶切及基因测序结果显示IL-37b基因正确插入真核表达载体pEGFP-N1中;RT-qPCR和Western blot结果显示转染THP-1细胞后,IL-37表达水平明显升高(P < 0.01)。
结论：成功构建了新型抗炎因子IL-37真核表达载体pEGFP-N1/IL-37b,为进一步研究IL-37功能及与相关疾病的关系奠定基础。
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