目的：研究益脑方改善记忆障碍模型小鼠学习记忆的药效学作用。

方法：连续灌服低、中、高剂量益脑方30d后，以东蓖若碱建立记忆障碍动物模型，并采用跳台法、穿梭箱法、Morris水迷宫法、避暗法检测小鼠的学习记忆能力的变化。结果与模型对照组相比，中、高剂量益脑方可显著延长小鼠跳台潜伏期并减少其5min内跳台错误次数，缩短小鼠穿梭箱及Morris水迷宫上台潜伏期，并可显著逆转由造模引起的超氧化物歧化酶（SOD)活力及乙酞胆碱(Ach)含量下降的作用(p<0.05)

结论：益脑方能显著改善记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力。

关键词：益脑方，学习记忆，小鼠记忆障碍模型

益脑方其主要配方为龙眼肉、莲子、核桃提取物、牛磺酸、黄茂，具有益气补血填精及健脑益智强记的功效，对老年痴为障呆、神经衰弱等记忆力减退者具有良好的记忆改善。为进一步验证其疗效并探讨其作用机制，我们利用记记忆功能碍模型小鼠，探讨益脑方对其学习记忆能力的影响，旨在为其临床防治记忆障碍性疾病提供实验依据。

1.  材料和仪器

1. 1实验动物SPF级雄性昆明小鼠，体重为18一22g。由中山大学实验动物中心提供，动物室通风和空调设备良好，室温控制在20一25度 ,相对湿度为45%一70 %。饲养室按常规定期消毒。

1. 2药物与试剂 益脑方由龙眼肉、莲子、核桃提取物、牛磺酸、黄茂等组成，水煎浓缩成1g生药/mL。氢澳酸东蓖若碱购自广州白云山明兴制药有限公司，0. 3mg/ (mL·支)，批号:

130403;戊巴比妥钠，购自Sigma公司产品，批号:120505。阳性对照药物:脑复康片，湖北华中药业有限公司，批号:201403060 SOD试剂盒与乙酞胆碱试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司产品。

3主要仪器 XR-3TB跳台系统。避暗系统，Morris水迷宫。

2方法

2. 1药物剂量设计及给药方法 72只SPF级雄性小鼠随机分为空白对照组(A组)、阴性模型对照组(B组)、阳性模型对照组(C组)。试验组分为低、中、高剂量组(0.6,1.2,2.4)。以0. 2mL/10g体重灌胃给予小鼠。正常对照组和模型对照组分别灌胃给予等体积生理盐水，每日给药1次，灌胃体积0. 2mL/10g体重，连续给药30d。

2. 2东蓖若碱致记忆获得障碍模型的建立 训练前15 min小鼠腹腔注射东蓖若碱按lmg / kg。制造记忆获得障碍模型。空白对照组与阴性模型对照组采用同等剂量生理盐水注射。然后依次进行跳台实验、穿梭箱实验、避暗箱实验、Morris水迷宫的训练及测试。

2. 3跳台实验 训练:将小鼠分别放入跳台仪的相应的格子内的平台上，当动物跳下平台后即给予36V的电刺激，持续2-3s，然后将其放回笼中。测试:学习实验24h后，将动物放回平台上，同时开动秒表，记录小鼠第一次跳下时间(即潜伏期)及小鼠5 min内跳下次数(即错误次数)。试验中如果5 min小鼠仍未跳下橡胶圆台，则潜伏期为300s。

2. 4穿梭箱实验 隔天训练一回，每回50次，连续训练4次。停止训练5 -50天内，分2一3次测定其记忆消退情况。

2. 5 Morris水迷宫试验 进行4次训练：小鼠分别从4个不同的入水点入水，如果小鼠在120s内未找到平台，需将其引至平台适应l0s。这时潜伏期记为120s,每次训练间隔20min，以4次的平均时间及路程作为每天的训练成绩，连续训练5d.

2. 6避暗法 末次给药后次日开始训练。将小鼠而部背向洞口放入明室。动物穿过洞口进入暗室受到电击，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5 min，并记录5 min内电击次数。24h后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min内的电击次数，并计算5 min内进入暗室(错误反应)的动物百分率。

2. 7各组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力及乙酞胆碱(Ach)水平检测  各组实验结束后将小鼠脱臼处死并立即摘取全脑并用生理盐水冲洗，滤纸吸干称取质量后加入9倍体积的生理盐水制成匀浆,4000g离心5min，取上清液作为待测样品备用，SOD活力及乙酞胆碱水平测定严格按试剂盒说明书进行。

2. 8统计学分析所有实验数据均以x士s表示，采用SPSS17进行统计学方差分析。多组间两两比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

3结果

3. 1益脑方对小鼠跳台成绩的影响

益脑方对小鼠跳台成绩的影响。与空白对照组相比，测试期模型组小鼠的触电潜伏期明显缩短(P <0.01)），5min内触电次数明显增多(P<0.01)。其中益脑方中、高剂量组可明显延长小鼠触电潜伏期(与阴性模型对照组相比P<0.01)，并减少5 min内错误次数(与阴性模型对照组相比P<0.01) 。

3. 2益脑方对小鼠穿梭箱成绩的影响

益脑方对小鼠穿梭箱成绩的影响。与空白对照组相比，训练第一天和第三天时,东若碱明显延长大鼠主动回避反应的潜伏期，而益脑方中、高剂量组可明显缩短潜伏期，其中中剂p

<0. 05，高剂量P<0.01。训练第五天时，益脑方中、高剂量组可明显缩短潜伏期，P<0.01.

3.3益脑方对小鼠Morris水迷宫试验成绩的影响 益脑方对小鼠Morris水迷宫潜伏期(s )的影响。与正常对照组相比，模型小鼠上台潜伏期显著延长，而益脑方中、高剂量组在训练第一天和第三天时可明显缩短潜伏期，其中中剂量P < 0. 05，高剂量P<0.01。训练第五天时，益脑方中、高剂量组可明显缩短潜伏期，P<0.01.

3. 4益脑方对小鼠避暗能力的影响 益脑方对小鼠避暗能力的影响.避暗法中与空白对照组比，模型组小鼠的潜伏期明显缩短(P < 0. 01) , 5min内触电次数明显增多(P<0.01)，表明造模成功。其中益脑方中、高剂量组可可明显延长小鼠首次出现错误的潜伏期(与阴性模型对照组相比p<0.01)，并减少5 min内错误次数(与阴性模型对照组相比P<0.01)。其中益脑方高剂量组对延长小鼠首次出现错误的潜伏期与阳性药物相当。

3. 5益脑方对小鼠脑内SOD及乙毓胆碱水平影响 益脑方对小鼠脑内SOD及乙酞胆碱水平影响(见表5)。结果表明模型组中SOD活力及乙酞胆碱含量均显著低于空白对照组(P<0.01).当利用益脑方时，其中高剂量可显著逆转由造模引起的SOD活力及乙酞胆碱含量下降的作用，其于模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01) . 

4讨论

实验结果表明，益脑方具有改善记忆障碍模型小鼠行为学指标及生理学指标的作用。跳台实验、穿梭箱实验、Morris水迷宫试验、避暗实验行为学指标均具有一定程度的改善。

小鼠脑内SOD活力及乙酞胆碱Ach水平也得到不同程度的改善。为益脑方临床应用于记忆障碍疾病的治疗提供了实验依据。

中枢胆碱能神经系统在学习、记忆中起到至关重要的作用，Ach是进行及维持高级神经功能的一种重要介质，与记J忆、学习和智力状况密切相关。在70年代，Deutsoh等通过动物实验发现胆碱能系统与记忆的形成和储存有关，进一步研究表明老年痴呆病人的新皮层和海马中乙酞胆碱合成酶活性降低川。莲子具有养心安神明口、补中养神等作用。核桃更是含有大量不饱和脂肪酸具有补脑功效，牛磺酸在脑内的含量丰富、分布广泛，能明显促进神经系统的生长发育和细胞增殖分化，且呈剂量依赖性，在脑神经细胞发育过程中起重要作用。黄茂则具有补中益气的功效，为传统补益类中药。

本实验为临床前期研究药物治疗学习记忆功能减退，改善学习和记忆功能提供了有效的参考资料，但是离真正的药物上市还有大量的工作做完成。益脑方对于学习记忆功能改善的确切机制还有待于进一步研究。

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来源：上海欣软信息科技有限公司

作者：张航航

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