利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna基因的初步研究
2016年09月19日
来源:中国比较医学杂志 2016年第08期
作者:刘丰 黄慧敏 王志华 吴西军 何志旭 舒莉萍
责任编辑:admin
摘要:建立下调lmna基因表达的斑马鱼动物模型,为核纤层病的深入研究提供动物模型。
目的:利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼lmna基因的技术方法。
方法:在斑马鱼lmna基因序列中选择靶点,设计针对斑马鱼lmna基因的吗啉代寡核苷酸序列(lmna-MO),构建能特异指示lmna基因表达的lmna-EGFP-pCS2+重组质粒,并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中,通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应lmna基因表达量,并通过蛋白质印迹法检测胚胎中lamin蛋白表达量。
结果:蛋白质印迹法检测斑马鱼体内lamin蛋白的表达,分别有大小为69 KD和62 KD两种蛋白表达。设计并构建了lmna-MO和重组质粒lmna-EGFP-pCS2+,单独注射lmna-EGFP-pCS2+质粒后观察到从6 hpf到96 hpf胚胎均有绿色荧光蛋白表达;二者共注射后观察到,与对照组相比,实验组从6 hpf至30 hpf胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失;蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内lamin蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎lmna基因表达。
结论:可通过lmna-MO和重组质粒lmna-EGFP-pCS2+共注射方法下调斑马鱼lmna基因表达,并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。
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