导语

长久以来，科研者们在抗击肿瘤的征途上举步维艰，为了揭示肿瘤发病机制，他们付出着孜孜不倦的努力。其中，肿瘤基因功能的作用机制研究便是研究者探索的重点，那么本文就将相关研究的经典实验套路分享给大家。

第一步：确定拟研究的基因（可行性分析）

首先，要确定肿瘤中具有研究潜能的功能基因A。最简单也最省事的方法，一是查文献，二是在数据库中查找，看这个基因是不是在肿瘤中有差异表达。最好选择没人报道过的基因，即便该基因已经有相关研究被报道，也不要太早放弃，可另辟蹊径从不同的角度来分析该基因。

其次，通过改变该基因在细胞内的表达，来探讨细胞表型是否会发生改变。常见的方式是敲减、过表达、突变，可构建相应载体或基因编辑技术来实现基因编辑。

第二步：确认研究表型

此时，需确定基因A对肿瘤功能的影响，如细胞增殖、凋亡、迁移侵袭、耐药，还有难度高一点的血管形成、能量代谢等。通常通过对基因A过表达或干扰后，检测基因表达改变对细胞表型的影响，来确定靶基因对肿瘤细胞表型产生了一定作用。

一般，会通过正反两种实验来验证细胞表型的改变，如验证细胞凋亡时，不仅需要做TUNEL实验，还需要补充一些rescue实验（在基因敲除细胞中重新导入基因A）。通常需要做2个以上的细胞株。

如果能得到理想的实验结果，可进一步推进研究；如果没有，请试着一下转移、耐药等方向，或者换一个分子。

第三步：分子作用机制／信号通路研究

首先要先找到与表型挂钩的信号通路分子，比如增殖相关Akt、p53、MAPK等信号通路。通常做法是寻找经典的信号通路与基因A之间的相互间的关系，并从中筛选出1-2个关键明星分子，检测其表达变化以及对信号通路的调节方式。

如果不幸的是，你并没有筛选到有变化的通路，此时可以采用比较烧钱的方法如基因／蛋白芯片来进行通路筛选。

第四步：动物实验验证

肿瘤研究中最常用的是裸鼠模型，即建立皮下移植瘤模型，再将基因导入动物体内，观察对体内肿瘤生长的影响，并进一步分析A基因相关的分子机制或信号通路，为肿瘤基因治疗提供潜在的靶点。

第五步：临床样本的验证与临床意义

最后，在大量临床样本中验证目标分子的表达。检测临床样本中功能基因A或功能基因A调控的下游分子的表达变化，分析其与肿瘤进展程度如肿瘤病理分期、复发、转移、预后等的相关性，确定基因A对临床研究的价值。

Note：第一步已完成的，此处可省略。样本量越大越有意义，差异越显著价值越高；若其表达水平能和肿瘤的病理进程相关，那么其临床意义就越凸显。