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实验方法

实验动物血液的采集

2016年12月15日 浏览量: 评论(0) 来源:《实验动物屏障环境与设施管理技术》 作者:赵效国 主编 责任编辑:yjcadmin
摘要:实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规检查或某些生物化学分析,故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。

实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规检查或某些生物化学分析,故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数,血红蛋白的测定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉。如研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱,需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH以及K+、Na+、Cl-离子浓度,必须采取动脉血液。采血时要注意:①采血场所有充足的光线;室温夏季最好保持在25~28℃,冬季以15~20℃为宜;②采血用具与采用部位一般需要进行消毒;③采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥;④若需抗凝全血,在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。现将采血方法按动物和部位分别加以介绍。

不同动物采血部位与采血量的关系可参考表12.7。

表12-7  不同动物采血部位与采血量的关系

常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量,见表12-8。

表12-8常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量

(一)小鼠、大鼠采血法

1.割(剪)尾采血  当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒,然后浸在45℃左右的温水中数分钟,使尾部血管充盈。再将尾擦干,用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3~0.5cm,让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取,采血结束,伤口消毒并压迫止血。也可在尾部做一横切口,割破尾动脉或静脉,收集血液的方法同上。每只鼠一般可采血10余次。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.3~0.5ml。

2.鼠尾刺血法  大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查),可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭,再用乙醇消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7号或8号注射针头刺入鼠尾静脉,拔出针头时即有血滴出,一次可采集10~50mm3。如果长期反复取血,应先靠近鼠尾末端穿刺,以后再逐渐向近心端穿刺。

3.眼眶静脉丛采血  采血者的左手拇、示两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠颈部(大鼠采血需带上纱手套),应防止动物窒息。当取血时左手拇指及示指轻轻压迫动物的颈部两侧,使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3~4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5~1.0mm),使采血器与鼠面呈450的夹角,由眼内角刺入,针头斜面先向眼球,刺入后再转1800使斜面对着眼眶后界。刺入深度,小鼠为2~3mm,大鼠4~5mm。当感到有阻力时即停止推进,同时,将针退出0.1~0.5mm,边退边抽。若穿刺适当,血液能自然流入毛细管中,当得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时将采血器拔出,以防止术后穿刺孔出血。

若技术熟练,用本法短期内可重复采血均无多大困难。左、右两眼轮换更好。体重20~25g的小鼠每次可采血0.2~0.3ml;体重200~300g大鼠每次可采血0.5~1.0ml,可适用于某些生物化学项目的检验。

4.断头取血  采血者的左手拇指和示指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤,并做动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈,1/2~4/5的颈部前剪断,让血自由滴入盛器。小鼠可采血0.8~1.2ml,大鼠5~10ml。

5.心脏采血  鼠类的心脏较小,且心率较快,心脏采血比较困难,故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血,先将动物做深麻醉,打开胸腔,暴露心脏,用针头刺入右心室,吸取血液。小鼠采血0.5~0.6ml,大鼠0.8~1.2ml。

6.颈动静脉采血  先将动物仰位固定,切开颈部皮肤,分离皮下结缔组织,使颈静脉充分暴露,可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉,离心端结扎,向心端剪口将血滴入试管内。

7.腹主动脉采血  最好先将动物麻醉,仰卧固定在手术架上,从腹正中线皮肤切开腹腔,使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织,夹住动脉近心端,用尖头手术剪刀剪断动脉,使血液喷入盛器。

8.股动(静)脉采血  先由助手握住动物,采血者左手拉直动物下肢,使静脉充盈。或者以搏动为指标,右手用注射器刺入血管。体重15~20g的小鼠采血0.2~0.8ml,大鼠0.4~0.6ml。

(二)豚鼠采血法

1.耳缘剪口采血  将耳消毒后,用锐器(刀或刀片)割破耳缘,在切口边缘涂抹20%枸橼酸钠溶液,阻止血凝,则血可自切口自动流出,进入盛器。操作时,使耳充血效果较好。此法能采血0.5ml左右。

2.心脏采血  取血前应探明心脏搏动最强部位,通常在胸骨左缘的正中,选心跳最明显的部位作穿刺。针头宜稍细长些,以免发生手术后穿刺孔出血,其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小,一般可不必将动物固定在解剖台上,而可由助手握住前后肢进行采血即可。成年豚鼠每周采血应不超过10ml为宜。

3.肌动脉采血  将动物仰位固定在手术台上,剪去腹股沟区的毛,麻醉后,局部用碘酒消毒。切开长2~3cm的皮肤,使股动脉暴露及分离。然后,用镊子提起股动脉,远端结扎,近端用止血钳夹住,在动脉中央剪一小孔,用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入,放开止血钳,血液即导管口流出。一次可采血10~20ml。

4.背中足静脉取血  助手固定动物,将其右或左、右膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用乙醇消毒,找出背中足静脉后,以左手的拇指和示指拉住豚鼠的趾端,右手拿注射针刺入静脉。拔针后立即出血,呈半球状隆起。采血后,用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时,两后肢交替使用。

(三)免采血法

1.耳静脉采血  本法为最常用的取血法之一,常作多次反复取血用,因此,保护耳缘静脉、防止发生栓塞特别重要。将兔放入仅露出头部及两耳的固定盒中,或由助手以手扶住。选耳静脉清晰的耳朵,将耳静脉部位的毛拔去,用75%乙醇局部消毒,待干。用手指轻轻摩擦兔耳,使静脉扩张,用连有5(1/2)号针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管,待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血,取血完毕用棉球压迫止血,此种采血法一次最多可采血5~10ml。

2.耳中央动脉采血  将兔置于兔固定筒内,在兔耳的中央有一条较粗、颜色较鲜红的中央动脉,用左手固定兔耳,右手取注射器,在中央动脉的末端,沿着动脉平行地向心方向刺入动脉,即可见动脉血进入针筒,取血完毕后注意止血。此法一次抽血可达15ml。但抽血时应注意,由于兔耳中央动脉容易发生痉挛性收缩,因此抽血前必须先让兔耳充分充血,当动脉扩张,未发生痉挛性收缩之前立即进行抽血,如果等待时间过长,动脉经常会发生较长时间的痉挛性收缩。取血用的针头一般用6号针头,不要太细。针刺部位从中央动脉末端开始。不要在近耳根部取血,因耳根部软组织厚,血管位置略深,易刺透血管造成皮下出血。

3.心脏取血  将家兔仰卧同定,在第3肋间胸骨左缘3mm处注射针垂直刺入心脏,血液随即进入针管。注意事项有:①动作宜迅速,以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固;②如针头已进入心脏但抽不出血时,应将针头稍微后退一点;③在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心、肺,一次可取血20~25ml。

4.后肢胫部皮下静脉取血  将兔仰卧固定于兔固定板上,或由一人将兔固定好。拔去胫部被毛,在胫部上端股部扎以橡皮管,则在胫部外侧浅表皮下可清楚见到皮下静脉。用左手两指固定好静脉,有手取带有5(1/2)号针头的注射器在内皮下静脉平行方向刺入血管,抽一下针栓,如血进入注射器,表示针头已刺入血管,即可取血。一次可取2~5ml。取血完后必须用棉球压迫取血部位止血,时间要略长些,因此处不易止血。如止血不妥,可造成皮下血肿,影响连续多次取血。

5.股静脉、颈静脉取血  先做股静脉和颈静脉暴露分离手术。

(1)股静脉取血:注射器平行于血管,从股静脉下端向心方向刺入,徐徐抽动针栓即可取血。抽血完毕后要注意止血。股静脉较易止血,用于纱布轻压取血部位即可。若连续多次取血,取血部位宜尽量选择靠近离心端。

(2)外颈静脉取血:注射器由近心端(距颈静脉分支2~3cm处)向头侧端顺血管平行方向刺入,使注射针一直伸至颈静脉分支处,即可取血。此处血管较粗,很容易取血,取血量也较多,一次可取10ml以上。取血完毕,拔出针头,用干纱布轻轻压迫取血部位也易止血。兔急性实验的静脉取血用此法较方便。

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