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小鼠DNAJB13与HK1 的相互作用

2017年01月04日 浏览量: 评论(0) 来源:南方医科大学学报 2016年第12期 作者:杨梦月 熊紫薇 李维娜 贾苗苗 刘刚 责任编辑:admin
摘要:我们对精子蛋白Co-IP结合质谱分析结果显示DNAJB13可能与HK1存在相互作用。为验证DNAJB13与HK1的相互作用,我们将其cDNA全长克隆到pGEX-4T-1上表达GST融合蛋白,行GSTpulldown技术检测DNAJB13相互作用蛋白,揭示了其作用机制的一个方面,给予临床工作一定的指导。

目的:探讨小鼠DNAJB13与HK1是否具有相互作用。

方法:应用双酶切连接方法构建pGEX-4T-1/Dnajb13原核表达载体,测序验证;重组质粒转化感受态细胞DH5α,用IPTG诱导融合蛋白GST-DNAJB13表达,采用SDS-PAGE考马斯亮蓝染色和 Western blotting分析蛋白和鉴定;提取小鼠睾丸蛋白,采用GST pull down检测DNAJB13与HK1是否具有相互作用。

结果:成功构建pGEX-4T-1-Dnajb13重组质粒,测序结果与标准序列一致;转化重组质粒的大肠杆菌在37 ℃,IPTG浓度1 mmol/L诱导下高效表达融合蛋白;GST pull down检测结果阳性,显示DNAJB13与HK1存在相互作用。

结论:在小鼠睾丸中,DNAJB13与 HK1存在相互作用,可能参与精子形成和精子运动。

 

全文阅读:小鼠DNAJB13与HK1 的相互作用

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