啮齿类动物被安乐死必须由经培训的人员使用合适的技术、设备和试剂。应尽可能快和无痛苦情况下诱导动物死亡。操作完成后，必须通过适当的方法确认死亡，如没有心跳、呼吸停止或注意到动物瞳孔扩张。只要切实可行，安乐死不应在动物室进行。安乐死的方法必须适用于动物的研究目的、种类和年龄，经动物研究批准必须符合安乐死AVMA指引。

 

CO2吸入法是常用的用于小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠安乐死的方法。操作的几个重要方法：

 

1、新生动物（长达10天）对CO2的影响是有抵抗力的.。请参考啮齿类动物胎儿和新生儿安乐死ARAC指南。

 

2、安乐死箱内物种不能混合。安乐死箱应从外面可见内部动物、动物不能过度拥挤、室内所有的动物必须能保持正常姿势。

 

3、压缩二氧化碳气体钢瓶，带控制二氧化碳流量控制器，是唯一推荐的允许流入安乐死箱的气体。不接受干冰作为CO2来源，不能预充二氧化碳气体到安乐死箱内。USP A级（医疗）或B级（工业）二氧化碳被视为可接受的，因为他们提供二氧化碳的最低纯度为99%。

 

4、不预先充气于安乐死箱内，将动物置于箱内并引入100%二氧化碳。填充率约为室容积的10%至30%二氧化碳每分钟。添加到室内气体应适当达到气体混合物平衡，以快速实现动物无意识和减少动物痛苦的目标。（例如，一个10升的体积箱，使用流量为1至3升（s）每分钟。动物突然暴露于70%或更大二氧化碳浓度时已被证明是痛苦的。

 

5、预期无意识时间通常在2到3分钟之内. 观察各啮齿动物发现缺乏呼吸和眼睛颜色褪色。呼吸停止后维持二氧化碳流量最小1分钟。如果观察到上述两个迹象，可以从安乐死箱中移除啮齿动物，否则继续将其暴露于二氧化碳中。如果在安乐死箱内2-3min仍有意识，应检查安乐死箱的二氧化碳填充率。应检查二氧化碳流量计是否损坏、是否钢瓶内没有二氧化碳或其泄漏。适当的CO2浓度和曝光时间能防止意外恢复。

 

6、一个公认和普遍的做法是群体动物进行安乐死。安乐死前安乐箱中的群体动物应确保每只动物能保持正常的姿势。动物尽量在其饲养笼内进行安乐死。当连续进行安乐死使用相同的笼/容器，安乐死的容器应清洗干净，消除残留气味对再次使用的动物造成的潜在的危机。每次安乐死的动物应使用清洁过的安乐死箱。