(一)材料与方法

1．实验动物

6～7周龄的雄性BALB/c-nu裸鼠30只，体重14～16g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003。

2．瘤源

SMMC-7721肝癌细胞取自本实验室－80℃保存的瘤株。

3．主要仪器

上海中医药大学实验动物中心裸鼠饲养室及相应设备；其余同前。

4．造模方法

方法同前。取体外培养传代第8日的SMMC-7721肝癌细胞，0.25％胰蛋白酶消化后离心收集细胞悬液，倒置于显微镜下细胞计数，无菌生理盐水调整细胞密度为1.9×10000000/ml，充分混匀，常规消毒后于每只BALB/c-nu裸鼠右腋皮下注射0.2ml，含细胞数为3.8×1000000个。

5．指标检测

四诊指标检测同前。第0日、6日、14日、17日、21日各检测1次，共5次。

6．统计分析

采用SPSS12.0统计软件，运用方差分析，P＜0.05表示在统计上具有显著性差异。

(二)实验结果

1．正常与SMMC-7721肝癌荷瘤BALB/c裸鼠的外观

正常裸鼠体格健壮、精神饱满、双眼有神、皮肤红润有光泽、姿态自如等；SMMC-7721人肝癌细胞在裸鼠腋下生长快，荷瘤裸鼠逐渐出现精神萎靡、双眼无神、眼裂变窄、右腋下肿瘤巨大且色泽晦暗、耳色与爪色淡白、站姿不稳等典型虚证表现(图4-1-46～图4-1-50)。

2．成瘤情况

10只接种SMMC-7721肝癌细胞于接种后第6日全部形成肿瘤，肿瘤形成率为100％。

3．存活情况

SMMC-7721肝癌组裸鼠接种后第21日，自然死亡1只，第23日全部死亡。死亡日期十分集中(图4-1-51)。

4．去瘤体重与瘤体积

SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠估算去瘤体重见图4-1-52，其中在接种第17日后SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠去瘤体重下降显著，出现典型的阴虚表现。从估算瘤体积可见，SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠肿瘤增长迅速，提示邪毒壅盛的程度严重，预后差，见图4-1-53。

5．腋温和抓力

在接种2周内，SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠腋温差异不显著，而接种2周后荷瘤裸鼠的腋温下降显著(图4-1-54)。随肿瘤的发生与发展，荷瘤裸鼠的抓力日益下降(图4-1-55)。

6．旷场检测

与正常小鼠比较，荷瘤裸鼠的旷场跨格数显著减少，而前肢离地数差异不大(图4-1-56、图4-1-57)。

7．爪r值和尾r值

正常裸鼠爪、尾颜色红润，反映红色程度的r值，在不同检测日有轻微的波动。接种后第17～21日，与正常对照组比较，爪尾色泽淡白，r值下降(P＜0.05)。提示荷瘤裸鼠在晚期，爪尾色泽变化显著(图4-1-58、图4-1-59)。

8．同病异证

进一步对标号为S1和S7的SMMC-7721肝癌裸鼠各证候的演变进行分析(图4-1-60、图4-1-61)。S1肝癌裸鼠接种前即有气虚，接种肿瘤细胞后，气虚持续，而血虚、阳虚、阴虚一直未形成。S7肝癌裸鼠接种前没有气虚证，接种肿瘤细胞后，气虚日益显著，但血虚、阳虚、阴虚等证均不明显。该结果提示，接种肿瘤细胞后荷瘤小鼠存在同病异证及其证候的演变。

四、讨论

1．关于造模

通常肿瘤增长快慢与接种的瘤细胞数量及其活力有关，一般瘤细胞数目要求在1×1000000ml～1×100000000ml。

对于鼠源性肝癌H22瘤株(腹水瘤)接种于KM种小鼠、C57BL/6小鼠腋下，均可以形成实体瘤。相比较，C57BL/6小鼠皮下肿瘤生长相对缓慢，且瘤体偏小， KM种小鼠相反；但生存时间接近。

体外培养的人肝细胞癌SMMC-7721可以直接接种在BALB/c-nu裸鼠皮下，异种移植能在小鼠皮下自然发生与发展；与KM种和C57BL/6荷瘤小鼠相比，荷瘤裸鼠带瘤生存时间较短。

2．关于同病异证和异病同证

三种荷瘤小鼠均会自发生成证候，随着疾病的发展，证候出现兼夹，程度也愈来愈重。其证候的自然发生和演变、同病异证和异病同证与人类类似。在证候方面，早期均以邪毒壅盛证和气虚证为主，中期证候呈现虚实夹杂特征、晚期表现出气阴阳俱虚证。因此，这些不同的荷瘤小鼠均可以很好地模拟临床肿瘤证候的发生与演变，用于辨证论治的实验研究。在三类肝癌荷瘤小鼠中，以SMMC-7721肝癌裸鼠病情严重，发展快，在证候方面，肿瘤邪毒壅盛程度严重，同时气血阴阳虚证程度亦严重，是典型的因实致虚。

采用计量化诊法和辨证，有助于实施不同荷瘤小鼠个体化辨证论治，以及疾病和辨证论治客观化、计量化的疗效评价。