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实验方法

2月龄去势雌性昆明种小鼠的证候

2017年02月10日 浏览量: 评论(0) 来源:《大鼠、小鼠辨证论治实验方法学》 作者:方肇勤 主编 责任编辑:yjcadmin

(一)材料与方法

1.实验动物

2月龄雌性昆明种小鼠45只,体重18±2g,购自中科院上海实验动物中心,生产许可证号:SCXK(沪)2003-0003。

2.主要仪器

去势用手术器械,其余同本章第十节中实验一。

3.药物与试剂

1%戌巴比妥钠、注射用青霉素钠0.5g/80万u,上海新先锋药业有限公司生产(批号:060902)。

4.造模方法

(1)分组

小鼠适应性喂养5天左右后,剔除体重过轻或过重的小鼠,剩余40只随机分为空白对照组(青年对照组,10只)、假手术对照组(10只)和去势模型组(20只)。对青年假手术对照组及去势模型组进行如下手术处理。

(2)造模与处理

1)假手术对照组:腹腔注射1%戊巴比妥钠45mg/kg麻醉,仅剪开同各去势组腹部同样位置皮肤和肌肉,找到卵巢并小心放回原位,随即缝合切口并消毒皮肤,缝合前腹腔注射青霉素钠8万U/kg以防感染。

2)青年去势组:麻醉同假手术组,结扎双侧子宫,去除双侧卵巢,伤口缝合、消毒,青霉素钠注射同假手术组。

5.指标检测

(1)四诊指标检测

分别在术后第10日、25日、40日、55日进行检测,共检测4次。方法及标准同本章第十节中的实验一。

(2)病理组织学

实验结束后,取各组小鼠子宫制作病理切片,常规HE染色。

6.统计分析

方法同本章第十节中实验一。

(二)实验结果

1.一般情况观察

去势模型组1只动物因为麻醉而死亡,另外1只在术后出现腹水而剔除。

各组与空白对照组小鼠相比,去势模型组小鼠在精神状态、皮毛等外观上的差别不明显。

2.子宫病理组织学

空白对照及假手术对照组内个体分别呈现增生期或分泌期改变。可见子宫内膜、肌层、浆膜层基本结构清晰,内膜固有层腺体丰富,腺上皮排列整齐,呈高柱状。子宫腔内有时可见脱落腺上皮细胞(图4-11-1、图4-11-12)。

    去势模型小鼠子宫结构清晰,但内膜厚度明显较两对照组低,固有层腺体数量减少,上皮细胞呈矮柱状,排列尚规则,上皮及固有层中核深染细胞增多。以上表明子宫内膜呈萎缩性改变(图4-11-13、图4-11-14)。

3.各模型的证候变化及程度

(1)气的虚实度

由图4-11-15~图4-11-18可知,去势模型小鼠与两个对照组小鼠气的虚实程度近似,存在波动。

(2)血的虚实度

由图4-11-19~图4-11-21可见,去势小鼠爪r值、尾r值和血虚实度总体上居于对照组之下,假手术组近似,但恢复趋势明显。其中,在第40日、55日检测,去势模型组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。表明去势或剖腹损伤精血,而去势后精血的复原较慢。

(3)阴的虚实度

由图4-11-22可知,去势后小鼠体重有增加趋势,第25日、40日、55日与空白对照及假手术对照组比较有统计学差异(P<0.05)。

(4)阳的虚实度

去势后腋温呈下降趋势,未检测到烘热/潮热表现。综合爪r值和尾r值程度,去势小鼠趋向于阳虚。其中去势第55日,去势组与空白对照组比较,差别具有统计学意义(P<0.05)(图4-11-23、图4-11-24)。

(5)同病异证

1)同一小鼠,疾病的不同阶段存在证候的演变。图4-11-25为No.34的去势小鼠,第10日体重重,其余无证可辨;至第55日,体重逐渐减轻,而出现了气虚的表现。

2)同一疾病,不同小鼠存在证候的差异。图4-11-26为若干去势小鼠同病异证情况,同样是第55日检测,No.49小鼠也出现体胖、形丰;No.50小鼠则无证可辨,No.51小鼠则出现了轻度的阳虚证表现。

 

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