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模型制备

颈动脉球囊扩张致兔动脉粥样硬化斑块动物模型

2017年03月03日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型复制方法学》 作者:周光兴 责任编辑:yjcadmin

(1)复制方法  体重约为1.5kg雄性实验兔,按1g/kg体重的剂量静脉注射25%乌拉坦麻醉,作颈正中线性切口暴露并游离右颈总动脉(CCA)、右颈内动脉(ICA)和右颈外动脉(ECA)。在右CCA近心侧距ICA、ECA分叉约2cm处及右ICA起始处用动脉瘤直夹临时夹闭,在暴露的右ECA距颈动脉(CA)分叉远心侧约1cm处结扎。自耳缘静脉注射肝素钠200U/kg,5min,用细针头作为穿刺针自右ECA结扎处近侧刺入动脉进入导丝,在穿刺点近侧束以牛皮筋以备止血。撤出右CCA动脉夹,继续进入导丝,撤除穿刺针(撤除时为防止穿刺点出血,拉紧牛皮筋),在导丝引导下2.0mm直径球囊导管经右ECA至右CCA入主动脉弓,然后将气囊充气,压力为810.6kPa(8atm)。自主动脉弓向右 ECA后退,机械扩张右CCA,重复3次,每次30s,使右CCA内膜剥脱及机械损伤,撤出导管,在穿刺点近侧结扎右 ECA,室温下标准混合饲料喂养。兔在处死前用10%水合氯醛腹腔内注射麻醉,固定于手术台。颈部正中切口,暴露双侧CCA,取自颈动脉分叉近心侧CCA 2cm节段送检,以左侧CCA作对照,分别送光镜与电镜观察。送光镜者用甲醛固定,常规石蜡包埋,切片厚约5μm,HE染色常规观察;送电镜者用戊二醛固定。用显微镜和计算机分析系统分别计算横截面管腔内径、内膜厚度和中膜厚度及内膜/中膜厚度比值。术后第15日为新生内膜层增厚,狭窄程度较第3及第7日明显,光镜下,术后第3日可见贴壁血栓形成,术后第7日,新鲜血栓少见,可见较明显的平滑肌细胞移位生长,内膜增厚;术后第15日,内膜明显增厚,主要成分为血管平滑肌细胞及丰富胶原的基质。电镜下,球囊扩张第15日,内皮细胞核呈长椭圆形,中等电子密度,细胞质中可见散在线粒体细胞,紧邻内皮细胞下可见到新生VSMC,其核呈不规则形,部分核膜内陷,胞质中可见大量细胞器,线粒体、粗面内质网、质膜小泡极为丰富,表明其功能极为活跃,此类细胞周围可见大量胶原纤维。

(2)模型特点  本模型内膜的机械损伤直接造成内膜的损伤、剥脱,内弹性板的断裂,极大地加速了脂质及钙盐的沉积、血流中炎症细胞的侵入;以兔作为模型动物,避免了大型动物(猪、犬)费用较高且饲养不便,大鼠颈动脉较细,必须使用显微镜且手术视野小不便于操作的缺点,兔易饲养,颈动脉较粗,易于分离颈动脉及导管操作,肉眼直视下手术且成功率高,此模型术后半个月狭窄程度较明显,适宜用作颈动脉PTA动物模型的建立。

(3)比较医学  本动物模型的制作用动脉夹在ICA起始处及CCA距动脉分叉近心侧2cm处结扎以游离颈动脉球囊扩张内膜剥脱节段,基本模拟了临床进行颈动脉PTA。该模型血管成形术后内膜增生的病理形态与人类球囊血管成形术后再狭窄的病理过程相似,包括平滑肌细胞增殖、内膜下迁移和细胞外基质增生;且血管成形术后内膜撕裂、血小板聚积、夹层形成,类似临床冠脉成形术后的病理变化。但也有不足之处,如病变缺乏钙化和中央脂质池等人类动脉粥样硬化的典型特点。

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