摘要：背景：目前仍然没有标准的大型动物模型来评估潜在的溶栓治疗的有效性。在这里，我们的目的是通过注入相似自体血栓栓子成分开发一种新的ST段抬高型心肌梗死（STEMI）犬模型。

 

方法：18雄性比格犬随机分三组：红栓组（n = 6），白栓组（n = 6）或白色栓子rt-PA组（n = 6）。自体栓子注入左冠状动脉前降支中远端区。用扫描电镜（SEM）观察栓子的组成。冠状动脉造影，以验证血栓的状态。通过2，3，5红四氮唑（TTC）染色测定心肌梗死面积。

 

结果：红血栓是电镜下红细胞疏松的网状结构，白色栓子为致密结构，主要由致密纤维蛋白组成。冠状动脉造影显示，在栓塞后三小时内，红色栓子组的再通率为2 / 6和白色栓子组的再通率为0 / 6。心律失常、心电图ST段抬高和T波下降在红栓子组出现，而非白色栓子组。另六只白色血栓的狗用rt-PA治疗。经过2小时的治疗后六条犬中有五条狗表现出冠状动脉再通。而没有经过rt-PA治疗组，六条犬中没有一条表现出冠状动脉再通。TTC染色法发现，rt-PA组心肌梗死面积与白栓组相比明显降低。

 

结论：白栓塞模型实验更方便，具有较高的均匀性、稳定性和成功率。本研究的主要创新是我们应用纤维蛋白丰富的白色血栓建立Beagle模型，具有临床观察冠状动脉血栓在STEMI患者的静脉溶栓治疗时间窗的特点。该模型可用于评价治疗STEMI的新型溶栓药物。

 

 

背景：溶栓治疗在抢救ST段抬高是至关重要的（STEMI），占心肌梗死病例的25%-40%。在经皮冠状动脉介入治疗（PCI）不能及时给予溶栓治疗STEMI患者，建议根据最新ACCF/AHA和ESC指南。住院前溶栓是抢救缺血心肌的重要干预措施，改善预后，为临床治疗提供更多的时间。大多数患者可从溶栓治疗中获益，但溶栓药物的特异性、有效性和安全性仍需提高。研制出效果快、副作用小的新药，建立符合临床状态的冠状动脉栓塞动物模型，尤其是血栓组成，良好的重复性和一致性是十分必要的。然而，以前的动物模型中的冠状动脉血栓大多是红色或混合栓子，这是不同的临床设置。在使用冠状动脉血栓抽吸技术之前，血栓形成时间窗的冠状动脉血栓的组成没有明确。最近，我们了解STEMI患者的冠状动脉血栓主要由血小板的，一小部分的纤维蛋白，少量红细胞，白细胞和胆固醇结晶组成。

这种富含纤维蛋白的血栓与脑血管血栓形成相似。Kirchhof等人用白色栓子制作兔脑栓塞模型，评价溶栓药物不应用于心脏。本工作的目的是建立一个理想的动脉血栓模型反映STEMI患者的临床综合征。因此，我们比较了红色和白色栓塞模型，在动物模型通过导管向冠状动脉中注入溶栓药物，研究其有效性。

 

方法：动物：21条雄性犬，体重12-17kg

制备栓子：在前人研究的基础上，我们做了一些修改。术前四小时，每只实验动物收集3毫升自体静脉血，准备个体匹配的栓子。白色血栓：静脉血无抗凝在4°C.1500 rpm，离心5分钟。提取上清液并注入硅胶管（直径为2.5毫米）后，将血液凝块放入37°C水浴中放置0.5 h。血凝块挤压成无菌板由针管自动缩回3小时（直径约1.2毫米），并切成5毫米长的圆柱体。对于红色栓子：注射器内的血液直接注入硅胶管，随后在37°C下放置0.5 h。随后的过程是相同于白色栓子制作。我们还测量了全血、上清液中纤维蛋白、血小板和红细胞的浓度。由全自动凝血分析仪测定纤维蛋白参数，用全自动血细胞分析仪测定血小板和红细胞。

 

冠状动脉血栓栓塞模型：动物用氯胺酮（35mg/kg）和地西泮（15mg/kg）麻醉，随后，剂量减半每小时一次维持麻醉。芬太尼（0.03 mg/kg）用于术中及术后镇痛。麻醉后，动物被贴在手术台在仰卧位和给予辅助呼吸同步间歇指令通气（SIMV）模式的气管插管。参数包括潮气量（10毫升/公斤），呼吸率（20次/分钟），呼气 /吸气（E / I）比（1：1.5-2）和氧饱和度（55 %）。对出现的心率失常进行监测。左前肢头臂静脉使用肝素和rt-PA注射。右前肢腋动脉分支插入动脉鞘管。在X线引导下，一个5 F导管插入左冠状动脉，以获得冠状动脉造影。将5 F导管位于左前降支近第一对角支，一栓注射阻断血流通过LAD中远端。由于导管不能插入太深，栓子可能到达对角支。因此，操作者必须仔细处理并避免栓子流入压力较低的血管。

 

溶栓治疗：LAD阻塞60分钟后，1000 U肝素钠注射液此后每两小时给予一次。RT -PA输液（0.4毫克/公斤）作为负载剂量，溶栓剂连续灌注超过30分钟（1.2毫克/公斤）以上。其余的rt-PA连续注入超过60分钟（0.8毫克/公斤）。该方案符合药品说明书，使用剂量为临床安全剂量。

 

冠状动脉灌注测量：动物在栓子注射前、注射时及注射后三小时每15分钟进行心电图记录，记录ST段、T波等变化，判断栓塞状态。冠状动脉造影，动物接受右前斜位和之前的栓子注入左前斜冠状动脉造影，在注射的时刻，注射后每30分钟观察阻塞和/或自溶程度连续三小时。，使用rt-PA或心律失常发生或心电图变化后10，20，30，60，90和120分钟也进行了冠状动脉造影来评估溶栓效果。再灌注时间定义为冠脉造影证实再通时间。

 

病理学研究：用扫描电镜（SEM）分析自体栓子。三小时后自动回收样品，样品用磷酸缓冲液冲洗三次，2%戊二醛固定120分钟，用磷酸盐缓冲液漂洗三次。然后将样品固定120 min，锇酸染色，漂洗，等级序列乙醇浓度脱水（50%，70%，90% 100%）40分钟，进一步在乙醇溶剂醋酸异戊酯脱水浓度（50%，70%，90%，100%）。血栓干燥10Min，通过拉伸来获得断裂表面以进行分析。凝块涂有金钯在扫描电子显微镜下检查。由2,3,5 -氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察心肌梗死面积。，静脉注射氯胺酮（35 mg/kg）联合地西泮（1.5毫克/公斤）将动物麻醉，此后注射10%氯化钾（15-20毫升）对动物进行安乐死。心脏被切除，切的横截面厚10毫米，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色。梗死面积为非TTC染色区，梗死面积（%）为梗死面积与左心室面积之比。我们还对LAD进行溶栓观察。对皮肤、粘膜、心、脑、肺、肝、脾、肾进行研究用显微镜检验估计出血风险。

 

结果：实验使用了21条犬。一只动物死于心室颤动，由于导管在LAD的持续时间。两只动物有对角支栓塞。这三只动物被排除在研究之外。最后，十八只动物随机分为三组，包括红栓组（n = 6），白栓组（n = 6）和白色栓子rt-PA组（n = 6）。

 

ECG：所有动物术前心电图正常。红栓子组和rt-PA组四例出现短暂性室性早搏，除颤后窦性心律逆转。此外，这六条动物目前冠状动脉再通（再灌注）根据冠状动脉造影如下所述。自体栓子注射后导联ST段、V1－V4 T波升高。红栓组心电图120 minST段回落和T波较低的，说明血栓自溶。在白色栓子组中均未观察到这两种情况。rt-PA给药溶解白色栓子后发现ST段回落和较低的T波。

 

冠状动脉造影：术前冠状动脉造影显示，实验动物的冠状动脉是正常的。LAD闭塞三小时后，两组红色栓子组出现再通，白色栓子组栓塞位置仍位于中远端。这些结果表明，白色栓子对后续实验可能是更好的。此外，六条中五条犬接受rt-PA治疗2小时后出现再灌注，而对照组六条犬中没有一条出现再灌注。rt-PA组再灌注时间平均为43.2±7.4分钟。

 

病理学研究：采用扫描电镜观察不同自体栓子的特点。白色栓塞比全血栓塞更为僵硬，因为白色栓子在相同体积下含有较多的纤维蛋白和红细胞较少。尸检后，皮肤、黏膜、心脏、脑、肺、肝、脾、肾等重要脏器未见明显出血征象。对于梗死面积的测量，个别切片拍摄的颜色使用图像J，量化心未染色的部分心肌坏死程度的测定。白栓组和rt-PA组梗死面积比分别为11.61±0.64%和4.48±0.52%。冠状动脉夹层检测溶栓情况与冠状动脉造影结果一致。

 

结论：首次建立了具有较好稳定性、均一性和较高成功率的白色血栓的冠状动脉栓塞模型。重要的是，该模型产生相似的特点，对溶栓治疗时间窗的STEMI患者血栓和溶栓治疗的评价是适合的。该模型可用于评价治疗STEMI的新型溶栓药物。

https://link.springer.com/article/10.1186/s12872-016-0194-6