利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究
2017年05月26日
来源:中国比较医学杂志 2017年第04期
作者:殷慧慧 李丹 李钰 孙菲 董施施 孔江峰 王洪宝 曾林 法云智 孙兆增
责任编辑:admin
摘要:利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。
目的: 利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。
方法: 利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。
结果: 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白。
结论: 利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。
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