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狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证
2017年06月07日
来源:中国比较医学杂志 2017年第5期
作者:邓怡晨 张晨 向志光 滕永康 刘云波
责任编辑:admin
摘要:本文从细胞水平筛选及验证狨猴B2m基因的沉默靶位点,为进一步探究B2m基因在狨猴体内的功能奠定基础。
目的: 在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证。
方法: 查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列。将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平。
结果: 筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P < 0.05)和(83.22±4.37)%(P< 0.0001),差异有显著性。
结论: 成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础。
全文阅读:狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证
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