单纯胰腺移植动物模型
(1)复制方法 成年雄性大鼠,体重250~300g,首先按55mg/kg体重的剂量经尾静脉注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病模型,以空腹血糖持续2周超过16.8mmol/L为模型复制成功标志。供体大鼠手术:雄性成年大鼠,经腹腔注射氯胺酮(100mg/kg体重)麻醉后仰卧固定于手术板上,常规消毒腹部手术区域并去毛,用手术刀作腹正中切口,分离胃结肠韧带并切除脾脏,分离胰腺与胃结肠的粘连,切断并结扎肝动脉和胃左动脉,游离脾动、静脉至根部,以门静脉为流出道,自腹主动脉原位灌4℃肝素冰平衡盐液(150kU/L),灌洗压力3.43kPa,直至胰腺组织变白和流出液清亮;切除约2/3胰体尾,在胰腺断面分离出胰管,于腹腔动脉远侧结扎并切断腹主动脉,近侧腹主动脉修剪成带脾动脉和腹腔动脉的血管段,供吻合用;于脾静脉远端切断结扎门静脉,于肝门处切断近端门静脉,远端套入直径2mm的套管,反折后固定,备袖套式吻合用;供胰用4℃肝素冰平衡盐液保存。受体大鼠手术:已预先复制的糖尿病模型大鼠,经腹腔注射氯胺酮100mg/kg体重麻醉后仰卧固定于手术板上,常规消毒腹部手术区域并去毛,用手术刀作腹中位切口,游离左肾动、静脉至根部,结扎并切断肾动脉及输尿管,阻断左肾静脉根部,于肾门处切除左肾;游离并阻断肾下腹主动脉,梭行切开主动脉前壁约3mm,用9个0号丝线与供体腹腔动脉行端侧吻合;供体门静脉(含脾静脉)与受体左肾静脉行袖套式吻合;依次开放左肾静脉、腹主动脉远端及近端,待血流再通后,立即以37℃温盐水复温;切断距屈式韧带远侧15cm的小肠,用甲硝唑液灌洗小肠远端与胰腺断端(含胰管)行胰肠吻合,于距胰肠吻合远侧10cm处,行近端小肠断端与远端小肠端侧吻合;用甲硝唑液冲洗腹腔,依次关腹。术前禁食不禁水24h,并一次性按100mg/kg体重的剂量肌肉注射氨苄青霉素;术后肌肉注射氨苄青霉素200mg/kg体重;手术24h后给予动物正常饮食,记录手术及缺血时间,并于术前2d及术后1、3、7、14、30d分别记录体质量、饮食量、饮水量、尿量及空腹血糖。
(2)模型特点 单纯胰腺移植的静脉引流包括供体门静脉系统引流和体静脉系统引流两种方式,临床实践中前者的受体远期存活率高于后者,而排斥反应发生率则低于后者。采用门静脉系统引流的大鼠单纯胰腺移植模型手术难度较大,且极易引起门静脉血栓及小肠损伤。目前大鼠单纯胰腺移植模型研究最常用的是体静脉系统引流方式,即供胰门静脉与左肾静脉行袖套式吻合,既缩短了吻合时间又降低了手术难度。采用的方法是供胰腹主动脉段(含脾动脉)和受体肾下腹主动脉行端侧吻合;由于腹主动脉直径可达2~3mm,且肾下脾主动脉分支少,可利用长度长,一般可达1cm左右,9个0号丝线可轻易吻合。本模型的早期手术成功率为80%左右,成功的单纯胰腺移植模型大鼠1d后血糖即下降;饮水量、食耗量、尿量均减少,2周后开始稳定,模型大鼠的内分泌功能可得到有效恢复。本方法建立的单纯胰腺移植模型稳定性和重复性较好,能够满足单纯胰腺移植的基础研究;但模型术后并发症较多,且缺乏术后长期观察及排斥反应的监测。
(3)比较医学 单纯胰腺移植(PTA)是临床上治疗无严重并发症糖尿病患者的有效方法。建立稳定而理想的大鼠PTA动物模型,对临床上患者单纯胰腺移植手术后的免疫耐受、缺血再灌注损伤等研究非常重要。成功的单纯胰腺移植手术不仅能终止患者糖尿病的发展进程,而且还可以使已有的糖尿病并发症得到有效的控制。临床上单纯胰腺移植手术失败率较高,其原因主要是受到易发术后并发症及排斥反应的影响。到目前为止有关PTA动物模型研究报道很多,包括胰十二指肠移植模型、胰肾联合移植模型和单纯胰腺移植模型等,这些模型选择的动物主要有大鼠、小鼠、猪和狗等;由于大鼠具有成本低、来源多,其免疫系统与人类相似等优点,是目前器官移植领域最常用的实验动物。本模型术后并发症主要为继发性胰腺炎及胰漏,这些并发症与手术技巧和缺血再灌注损伤有关。预防的办法除了取供体时尽量操作轻柔外,还要尽量缩短冷缺血时间;同时要确切结扎供胰表面的微小创面。在行胰肠吻合时,要牢固缝合两层,使整个胰断面连同胰管确切套入小肠内,避免手术失败。
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