简介：下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）过度活跃和中枢促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）系统受损是抑郁症发病的诱因。虽然在几个公认的行为测试中CRF1受体拮抗剂抗抑郁活性有效，CRF1受体抑制剂和传统的抗抑郁药物之间潜在的相互作用仍知之甚少。我们研究的目的是评估sn003，CRF1受体阻滞剂，抗抑郁药物丙咪嗪和盐酸氟西汀对有抑郁症状在大鼠强迫游泳试验（FST）中的活性影响。雌性wistar大鼠, 14天皮下注射皮质酮（CORT）（20毫克/公斤/天）。抗抑郁药的作用是由FST和下丘脑、杏仁核和外周血CRF水平由高灵敏度免疫酶试验确定。sn003（0.5 mg/kg）增强丙咪嗪（15毫克/公斤）和氟西汀（7.5毫克/公斤）的抗抑郁作用。两测试试剂的共同使用，取消CORT所致CRF水平增加。我们目前的发现进一步证明了CRF活性的抑制可能有助于治疗情绪障碍。抗抑郁药与CRF1受体拮抗剂同时使用，在安全性方面是有益的，因为它使用较低剂量的药物。

 

 

简介：观察到抑郁症患者下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）的过度活跃，被认为是该病发病机制中的一个重要因素。虽然HPA轴对内分泌应激反应至关重要，促肾上腺皮质激素释放因子（CRF），也被称为促肾上腺皮质激素释放激素，在调节神经内分泌反应中起重要作用。CRF在下丘脑室旁核小细胞神经元作为一种激素，而CRF在大脑的其他区域产生作为一种神经递质。在紧张的情况下，观察到CRF合成和释放增加，这反过来又触发的促肾上腺皮质激素（ACTH）的释放，其次是较高的合成及糖皮质激素皮质醇的释放（灵长类动物）和皮质酮（啮齿类动物）。在健康受试者中，糖皮质激素会产生负反馈，导致CRF、促肾上腺皮质激素和皮质醇/皮质酮的合成和释放减少。在抑郁的受试者中，HPA负反馈回路可能受损。CRF水平升高不仅导致神经内分泌改变，而且也影响到与应激反应相似的行为和生理变化（增加心率、失眠、抑制陌生环境中的探索行为、疏导行为、性兴趣和食物摄入下降）。CRF的作用通过两种不同的CRF受体（CRF1和CFR2），参与焦虑和抑郁相关行为的调制。特别是给定的CRF1受体作为潜在的抗抑郁活性物质的目标。高CRF1受体密度在大脑皮层，小脑、嗅球、海马、杏仁核、内侧隔核、垂体被发现。CRF1受体拮抗剂是公认的对行为测试（即大鼠强迫游泳试验，FST；悬尾实验，TST）和动物模型（慢性应激模型，慢性青少年应激）评价抗抑郁新的药物作用有效。在我们以前的研究中，我们还发现一个高亲和力的非肽类CRF1受体拮抗剂，显示> 1000倍的选择性CRF2受体-sn003-具有抗抑郁活性。非肽类化合物似乎具有特殊的价值，因为基于肽的CRF受体拮抗剂是不能通过血脑屏障渗透的。对CRF1受体阻滞剂的抗抑郁疗效的临床试验的患者因不良反应停止。观察到的作用与帕罗西汀（即选择性5-羟色胺再摄取抑制剂）的作用相当，停药后的情感症状明显恶化。

 

现有资料表明，CRF1受体阻断可能成为治疗抑郁症的另一个策略。对CRF1受体和常规抗抑郁治疗的抑制剂之间的相互作用知之甚少。我们决定评估sn003对丙咪嗪（三环类抗抑郁药）和氟西汀（一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂）在皮质酮（CORT）处理大鼠FST试验中的活性的影响。sn003，作为CRF1受体抑制剂完全拮抗CRF效果。最近发现，sn003有双重作用，即，除了抗抑郁药的潜力还降低逼尿肌反射亢进的症状。从临床的角度来看，这种化合物的特性是非常重要的，因为膀胱过度活动症和抑郁症常常共存，并对生活质量产生重大影响。在目前的研究中使用CORT抑郁症模型。14天的CORT治疗组大鼠导致循环血清CRF水平升高，从对照组的6.41 ± 0.28 pg/ml升高到给药CORT组（20毫克/公斤/天）的23.39 ± 1.13 pg/ml。长期用糖皮质激素处理的大鼠可能是测试CRF拮抗剂作用的一个非常有趣的模型。

 

材料和方法：动物：雌性Wistar大鼠，体重200-225克，12/12光/暗周期，温度22±1°C，湿度60%。动物自由采食和饮水。将大鼠随机分为10个实验组，每组13～15个：第一组（对照组）给予生理盐水14天；第二组皮质酮（20毫克/公斤/天）给药14天；第三组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加丙咪嗪（30毫克/公斤）；第四组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加丙咪嗪（15毫克/公斤）；第五组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加氟西汀（15毫克/公斤）；第六组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加氟西汀（7.5毫克/公斤）；第七组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加上sn003（1毫克/公斤）；第八组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加上sn003（0.5毫克/公斤）；第九组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加丙咪嗪（15毫克/公斤），加上sn003（0.5毫克/公斤）；第十组皮质酮（20毫克/公斤/天）14天，加氟西汀（7.5毫克/公斤），加上sn003（0.5毫克/公斤）。

 

药物：使用下列药物：皮质酮（CORT）、丙咪嗪（IMI），氟西汀（FLX），和sn003。在前期实验的基础上，选择了剂量和预处理方案。CORT，IMI和FLX分别溶于生理盐水，sn003溶解在积约100μL的二甲基亚砜（DMSO），稀释于生理盐水，导致最终浓度约为1%的DMSO。CORT（20毫克/公斤/天）或生理盐水皮下注射（SC）14天，IMI（15或30毫克/公斤）和氟西汀（7.5或15毫克/公斤）腹腔注射（ip），sn003（0.5或1毫克/公斤）静脉注射（IV）。除了皮质醇药物均给予单剂量。最后一次皮质醇给药后48小时及IMI、FLX或sn003注射后60 min。所有给药溶液的体积为10毫升/千克。

 

强迫游泳实验：FST是按照前面描述的方式执行的。起初，动物被单独放入玻璃缸（高度65厘米，直径25厘米），含48厘米的水（23 - 25°C），并在那里停留15分钟（预试）。24小时后，大鼠在相同游泳条件下重新测试5 min。当一只动物被动地浮在水面上时，只做缓慢的动作以保持它的头在水面上它被认为是不动的。

 

自发活动：一个Digiscan装置、光学动物活动监测系统，用于对大鼠的自发活动的评价。将动物分别放入活动室内，适应15分钟后，自动测量自发活动1小时。

 

促肾上腺皮质激素释放因子测定：在下丘脑、杏仁核和外周血中测定CRF水平。为了避免HPA轴激素的昼夜变化，CORT /生理盐水是在上午8和9点之间给药。动物在行为测试后立即被杀死。收集外周血，分离下丘脑和杏仁核。脑结构匀质化。通过一个高灵敏度免疫酶试验确定CRF水平。

 

结果：FST：使用2周CORT后，显著降低大鼠在FST试验中的活动。单剂量IMI给药（30毫克/公斤；F（2,42）= 19.36；P＜0.0001），氟西汀（15毫克/公斤；F（2,42）= 13.12，P＜0.0001），或sn003（1毫克/公斤；F（40）= 34.70，P＜0.0001）逆转CORT引起的抑郁。测试剂的剂量较低时（15，7.5，或0.5毫克/公斤）不影响CORT反复给药引起的动物行为。然而， IMI（15毫克/公斤）或氟西汀（7.5毫克/公斤）与sn003（0.5 mg/kg）联合给药取消应用糖皮质激素促抑郁活性。单因素方差分析显示试验组之间有显著性差异。

 

自发活动：与对照组相比，没有一种单独或联合注射的试验药物影响大鼠的自发活动。

 

CRF水平：皮质酮（20毫克/公斤/天）给药14天后，在下丘脑（t（27）= 12.35，P＜0.0001），杏仁核（t（27）= 4.25，P＜0.0002），与外周血（t（27）= 17.49，P＜0.0001）CRF水平升高。单剂量IMI，FLX和SN003在较高剂量时能逆转CORT影响。低剂量的FLX（7.5 mg/kg）或sn003（0.5 mg/kg）降低外周血或下丘脑和杏仁核CRF升高水平。较低剂量的抗抑郁药（IMI或FLX）与低剂量的sn003同时给予废除CORT诱导下丘脑、杏仁核、和外周血CRF水平的增加。

 

结论：证据表面CRF的活性被阻断可能是治疗抑郁症的有效手段，无论是单药治疗还是联合使用传统的抗抑郁药物。抗抑郁药与CRF1受体拮抗剂同时使用，在安全性方面是有益的，因为它需要较低剂量的药物。然而，结果需要通过更多的研究来证实，包括不同抑郁模型的实验。