改良的两步复合酶消化法制备大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞
2017年08月08日
来源:中国比较医学杂志 2017年第07期
作者:周玥华 刘星 张艳军 汪辛 陈渝萍
责任编辑:admin
摘要:我们考察了国内外各种VSMC分离方法,对实验细节反复摸索和优化,建立了一种改良的复合酶消化法,并成功地应用该方法进行了大鼠VSMC的分离制备。和报道的其它VSMC分离制备方法相比,该方法操作简捷易行,操作时间短。分离的重复性极好、成功率很高,可确保所获得的VSMC的数量、活性、纯度及其收缩型表型。
目的: 本文报道一种基于复合酶消化法进行改良的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的分离方法。
方法: 采用胶原酶、胰肽酶复合酶对胸主动脉进行初步消化去除内外膜、再对中膜进行二次消化释放血管平滑肌细胞。
结果: 细胞分离后贴壁生长,多具梭形形态,呈现典型的“峰-谷”生长状态,1周可进行传代;多种收缩型血管平滑肌细胞的分子标记基因均在所分离培养的细胞中高表达;超过95%的细胞为alpha smooth muscle actin(α-SMA)和myosin-Ⅱ显著阳性。
结论: 本分离方法简捷易行、重复性好,所得细胞活性佳、纯度高,可确保短时间内获得大量收缩型血管平滑肌细胞。
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