C57BL/6J小鼠冻融IVF原核胚用于Cas9显微注射探讨
2017年09月21日
来源：中国比较医学杂志 2017年第8期
作者：曾文滔 周建丽 赵书琴 张亚男 梅云
责任编辑：admin
摘要：随着B6小鼠体外受精技术的完善，采用冻精（鲜精）IVF技术批量生产胚胎可节约大量科研经费和时间，大型基因编辑实验室已经实现无活体雄鼠化模式（或少量）。但使用IVF获得双原核胚胎至少需要8h，对后续实验的连续性影响很大，本文针对这一关键点，对B6小鼠原核胚冻融后的存活率、注射存活率及2细胞发育率做了相关实验比较，探讨IVF 结合胚胎冷冻技术应用于Cas9显微注射的可行性。
目的： 探讨小鼠体外受精（IVF）冻融后用于Cas9注射的可行性。
方法： 新鲜C57BL/6J小鼠卵子IVF后采用冻存管法（EFS20/40）冷冻原核胚（单细胞胚）和2细胞胚胎，次日复苏后培养。比较冻融原核胚和2细胞胚胎的回收率及成活率。选取部分冻融原核胚与新鲜原核胚同时进行Cas9和稀释液胞质注射并培养至2细胞，分别比较注射后的存活率及2细胞发育率。
结果： 冻融后的B6小鼠原核胚的回收率为92.5%、成活率为92.8%，2细胞胚的回收率为90.5%、成活率95.8%，两组数据差异无显著性（P>0.05）。新鲜原核胚Cas9注射后的存活率为92.7%，空白组注射组为97.5%，冻融原核胚Cas9注射后的存活率为82.6%，空白组为92%，冻融组Cas9注射与各组差异有显著性（P<0.05），其它各组差异无显著性（P>0.05）。注射后的2细胞胚发育率差异无显著性（P>0.05）。
结论： 冻融原核胚可用于Cas9显微注射。
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