摘要：本文目的构建小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)非编码蛋白(UTR)片段标准品，用于实时荧光定量 PCR检测小鼠脑脊髓炎病毒。方法：RT-PCR 扩增TMEV UTR片段上80~1094 nt之间长度为1 014 bp的片段，将目的片段连接至pMD18-T载体,转化至DH5a感受态细胞，分别经PCR鉴定和序列测定验证重组质粒。分光光度计测量重组质粒的吸光值，换算成拷贝数浓度后作10倍梯度稀释制得质粒标准品，然后进行实时荧光定量PCR分析，绘制标准曲线。结果：TMEV UTR片段成功克隆至pMD18-T载体中，测序结果表明重组质粒中插入的UTR序列正确,实时荧光定量PCR分析10倍梯度系列稀释的质粒标准品所得到的标准曲线良好,统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上。结论：成功构建了TMEV UTR 片段实时荧光定量PCR标准品，为今后TMEV实时荧光定量PCR检测打下了基础。

    全文阅读见：《实验动物与比较医学》 2012年1期