方法：为了建立兔肾旁癌模型，我们用冷冻VX2肿瘤标本接种四只供体兔后肢。接种后，观察家兔的食欲和疼痛症状。可行的肿瘤表现为接种2周内出现可触及的结节。通过高分辨率超声分析和组织学检查证实肿瘤生长。一旦肿瘤生长建立，提取后肢肿瘤用于肿瘤的传播和建立肾肿瘤。对肾胶囊植入VX2肿瘤建立了二十一例肾癌兔模型。植入后1-3周，肿瘤结节发展到2–3 厘米。肿瘤植入一周后连续肾超声随访。接种2周后，处死兔，采集肿瘤和其他器官用于组织病理学检查。

 

结果：应用高分辨率超声（美国）对肾旁区进行影像学检查，用数字卡尺测量证实VX2肿瘤移植瘤生长。对VX2肿瘤的经肾注射，肿瘤生长率为100%。所有数据均经组织学检查证实。

结论：本研究首次将VX2肿瘤冰冻切片植入兔副肾区，建立了肾旁癌模型。这种方法最大限度地减少非坏死肿瘤转移和发展，并将优化局部区域治疗实验肿瘤反应的评价。

 

 

背景：兔VX2肿瘤模型常用于实验性肿瘤学。兔VX2肿瘤是一种未分化鳞状细胞癌由病毒引起的。值得注意的是，该模型已被用来模拟各种类型的癌症，包括胰腺，肾脏和肝脏。VX2细胞移植可以通过植入固体肿瘤片或注入肿瘤细胞悬液（新鲜或冷冻）来实现，如先前描述的那样。多种形式的新辅助治疗和辅助治疗已被用于与外科手术相结合，以改善局部肿瘤的局部控制，肿瘤切除后局部复发率很高，如直肠癌，软组织肉瘤和胰腺癌。本研究建立了一种局部植入VX2冷冻肿瘤的兔肾旁癌模型。这一肿瘤模型将有可能用于评估实体瘤术后局部复发风险高的多模式治疗。

 

方法：动物准备：二十五只新西兰兔（体重2.5–3.5 公斤）自由采食和饮水，在设施中适应一周。手术后兔子被放在临时加热的笼子里，以恢复生命的功能。然后被转移到正常的笼子里。

VX2肿瘤碎片制备：VX2肿瘤碎片被储存在–80 °C冰箱中，直到使用。含肿瘤碎片的瓶子被放在一个37 °C水浴快速但不完全解冻。用无菌解剖手术钳小心地从冻存管中取出肿瘤块，然后放入培养皿上。培养基中含有25 毫升含5%胎牛血清的DMEM培养基。随后，该碎片经冷的Hanks平衡盐溶液洗涤。在两个清洗过程中，这些碎片都经过3次仔细清洗。肿瘤位置于15ml冷HBSS无菌培养皿，并置于冰上，直到植入动物体内。

VX2后肢肿瘤的发生和收获：四只新西兰白兔被用来在下侧脊肌上复制VX2肿瘤。手术前所有家兔美托咪定（0.2 毫克/公斤），氯胺酮（10 毫克/公斤）和布托啡诺（0.5 毫克/公斤）联合麻醉。经气管插管2%七氟烷和盐酸氯胺酮（30 毫克/千克）维持全身麻醉。麻醉和术前皮肤准备后，在右后肢至肌腹划开2.5 厘米切口，5立方毫米的 两小肿瘤块植入到每个后肢股四头肌，止血并缝合切口。在肿瘤植入后10–14天，一个可行的肿瘤表现为可触及的大约2.5 厘米 × 3 厘米结节。超声检查证实肿瘤生长，然后进行后肢肿瘤提取。每只兔，在全身麻醉下接受注射1 毫升/公斤tanax进行安乐死。随后，右后肢至肿瘤周围区进行皮肤准备和4–5 cm切口。肌肉内做了两个曲线切口进行肿瘤集体切除术。切除的肿瘤被一分为二，去除坏死核，来获取可用的肿瘤。肿瘤碎片被放入30ml含3% 10000 IU/mL青霉素，链霉素10000微克/毫升和1%两性霉素B（250微克/毫升）的RPMI1640培养基中30min，肿瘤组织被放置在一个100 mm培养皿，任何可见的非肿瘤组织被削去。肿瘤组织被碎成几块（约5 mm3每个）。肿瘤碎片经约20毫升HBSS， 20 ml 加5%胎牛血清DMEM/F12培养液迅速洗涤，每种3次。一半的肿瘤组织被用来开发一个肾肿瘤模型，而剩下的部分被冻存。

 

兔VX2肾旁肿瘤模型的建立：本实验采用二十一只家兔，其中五只植入新鲜肿瘤组织，十六只冰冻切片。在处死动物前，从兔耳获取血液进行检测。血液离心（3000 转，5 min）分离血浆部分。对肝酶（ALT、AST、GGT、碱性磷酸酶）胆红素和全血细胞计数（CBC）进行了评估，每7 天重复一次，直到牺牲的动物。为对肾植入肿瘤，对兔进行剑突-脐开腹手术。钝性剥离暴露腹膜。仔细剖分腹膜可探测腹膜腔。挪动肠，左腹膜后间隙上肾包膜切开术。然后将一个肿瘤碎片置于这个肾旁空间。缝合切口。确认止血后，闭合腹壁切口。手术后兔子被放在暂时加热的笼子里，以恢复生命的功能，然后被转移到正常的笼子里。每日观察食欲、粪便和尿液的数量和浓度、精神状态和活动水平。采取适当的治疗措施，以解决日常观察中注意到的任何异常，并记录在适当的动物福利表中。活体超声显像评价肿瘤生长。

 

活体高分辨超声成像：每只兔子卧在一张专用的桌子上。体温是由直肠探头监控和通过加热毯维持在37 ± 0.5 °C。所有成像设置在所有动物的成像过程中保持不变。动物在术后第七天，术后第十四天检测在手术种植区和肝肿瘤发展情况。每只兔，探索所有的腹部实质性脏器和腹膜腔，以评估任何实质性病变内或腹膜后游离液体的存在。特别是，肾脏的大小，形状和位置，周围和肾旁的空间。

 

组织学检查：在全身麻醉下处死动物，对肾脏标本进行宏观和微观研究。各器官切成5毫米的切片，恶性病变是由两个观察员的共识确定。代表性样品冷冻，冰冻切片机切片，常规HE染色光镜下检查。

 

结果：兔VX2肢体肿瘤模型的建立：建立4只兔后肢右下右脊肌VX2肿瘤模型。两个小肿瘤冰冻切片（以前在温水中解冻），植入到每只兔后肢股四头肌。经过10–14天每只兔获得了大约2.5 厘米 × 3 厘米的肿瘤。在手术后7和14 天，检测肿瘤特征不均匀，不规则，浸润性肿块，在肌肉组织生长。为了获得VX2肿瘤细胞系的增殖和肾肿瘤的发生，在兔子牺牲后进行了后肢肿瘤的提取。一半的肿瘤组织采用新鲜的方式建立肾肿瘤模型，而剩下的部分则被冻结。通过组织学分析证实肿瘤细胞存在于肿瘤标本中。

 

兔VX2肾旁肿瘤模型的建立：为了生成对肾肿瘤VX2兔模型，受兔行剑突-脐开腹手术。钝性剥离显露腹膜。结果如图所示。必须强调的是，肿瘤碎片的植入可使肿瘤生长达到100%。迄今为止，这是首次报道一种冷冻VX2肿瘤的外科肿瘤植入术治疗兔肾旁癌的模型。

 

结论：本研究首次将VX2肿瘤冰冻切片植入兔副肾区，建立了肾旁癌模型。这种方法最大限度地减少非坏死肿瘤转移和发展，并将优化局部区域治疗实验肿瘤反应的评价。