外科手术
引言
IACUC和AV有责任确保手术操作中的动物得到人道的护理和使用，有责任确保实验操作人员的资质和培训。本章涉及动物手术中的几个重要问题，如麻醉、无菌技术，以及在生物医学研究和教学中，动物存活手术和非存活手术的术前护理等问题。为了更好地阐述本章要说明的问题，本书的第一版包括对12份IACUC审查批准的实验方案的调查。第二版包括的调查范围更为广泛，共得到160条反馈意见。由于我们尽可能将这两次调查结果融合在一起，因此对某些调查事项的反馈意见多于160条。
18.1 在研究人员向IACUC申请实施存活手术的方案中应提供哪些信息?需要做哪些详细的说明?
法规要求
有许多法规对存活性手术提出要求。从广义上讲，这些要求主要是关于适当的兽医护理问题(参见第27章；AWAR§2．33；PHS政策Ⅳ，C，1，e)。IACUC特别关注以下几方面的问题：
● 进行适当的麻醉和镇痛 (参见第16章)
● 无菌技术的使用 (参见18.11～18.18)
● 存在多次存活手术 (参见18.6～18.10)
● 手术人员资历认证 (参见18.19)
● 手术期间的护理 (参见18.20～18.10)
● 是大手术还是小手术 (参见18.3～18.5)
● 要对手术程序进行捕述(AwAR§2．31，d，2；§2．31，e，3；PHS政策Ⅳ，
C，l；Ⅳ．D，1，c)并说明是否符合AWA的要求(PHS政策Ⅱ；Ⅳ，C，1)
观点
在向IACUC申请的实验方案中，研究人员应提供充足的手术操作细节，以便委员会能够确认申请的手术技术是可以接受的．使AV能够对围手术期护理程序是否包括所需要的兽医护理做出判断[1]。作者认为，切口位置、长期测量仪器和植入物(在使用时)及伤口缝合方法(包括缝合线的粗细和种类)，都应在手术方案中说清楚。此外，描述麻醉方法时应包括前驱麻醉剂、麻醉剂和镇痛剂的名称，以及剂量、给药途径和给药频率。如果使用神经肌肉阻断剂，应列出激动剂和逆转剂的名称、剂量和给药途径。在使用过程中，PI要记录动物疼痛的消失情况，对心率这些不受神经肌肉阻断剂影响的生理参数也需要记录。这样做可以使AV和IACUC在这些研究范例中处于更有力的位置(参见16.28)。
调查
在IACUC方案中专门描述存活手术的部分应包括哪些信息?对手术程序的说明应详细到什么程度?(可多选)
● 要详细地描述外科手术，应包括以下方面：
● 切口位置和长度 96/165
● 涉及的器官 107/165
● 测量仪器和植人物 112/165
● 使用的缝合材料类型 79/165
● 皮肤或伤口缝合方法 94/165
●用于皮肤或伤口闭合的缝合线种类 117/165
●什么时候(或是否需要)拆除缝合线 97/160
●不进行大的存活手术 28/160
●关于手术方案中的麻醉方法：
●列出包括前驱麻醉和麻醉的药物、给药剂量、给药途径和给药频率 145/165
●提供麻醉剂的补充剂量 1/165
●麻醉持续时间是多长? 108/165
●是否给予神经肌肉阻断剂? 95/165
●提供神经肌肉阻断剂的剂量和给药途径 91/165
* 涮查总数少于165人，因为这两个选项都没有包括在本书第一版的调查中。
**这一选项在本书第一版中有，此处提到的1/5受访者是第一版的内容，在第二版的调查中不包括此项。
18.2 在提交给IACUC的非存活手术方案中，研究人员应提供哪些信息?
观点
和存活手术程序一样(参见18．1)，在提交给IACUC 审查的方案中，研究人员应提供充足的非存活手术细节，以便IACUC能够确认申请的手术技术是可行的，AV能够对术前和术后的护理程序中兽医护理的充分性做出判断。描述麻醉方法时应包括前驱麻醉和麻醉用药，以及给药剂量、途径和频率。如果使用神经肌肉阻断剂，应写出激动剂和逆转剂的名称、剂量和给药途径。在使用过程中，PI要记录动物疼痛的消失情况，对心率这些不受神经肌肉阻断剂影响的生理参数也要求记录。这样做可以使AV和IACUC在这些研究范例中处于更有力的位置(参16.28)。有些IACUC的要求比现行法规(如《指南》第62页；AWAR§2．3l，d，1，Ⅸ)更为严格，如要求说明手术服、空间需求、无菌操作、过期药品和静脉注射液的使用情况。在这种情况下，IACUC应明确向研究人员提出有关规定和要求。
18.3 在向IACUC提交的方案中包括非存活手术，研究人员是否必须对此做出详细的说明?
观点
应向IACUC做出详细的说明，确保手术程序不被修改，就像存活手术一样受到同样的管理和关注。如果非存活手术和存活手术同在同一方案或是其他方案中的一部分，那就更容易达到这些规定的要求。
有些操作，特别是那些不需要大量的手术中管理的操作，不太需要细节描述。例如。单独获取一个组织或者，也许，经过一些生理检测后，仅需要一个“梗概”的手术描述，如“在动物做好准备并被覆盖好后，用中线剖腹手术解剖动物。将肾动脉和静脉在骨盆处结扎，摘除肾脏。对动物如在……项中说明的一样执行安乐死”。
当手术时间长或护理工作重时，就需要对手术程序进行详细说明，否则将可能导致动物疼痛或痛苦。如在测定血压、心室腔的压力容积曲线和壁压等一系列生理参数时，需要进行血管捅管操作。在这种情况下，需要麻醉动物使其稳定以便获得可靠的数据。此外，由于存在出血和补充血容量的问题，因此IACUC需要了解更详细的信息。
描述麻醉方法时应包括麻醉前驱药物和麻醉药物、剂量、途径和给药频率。如果使用神经肌肉阻断剂，应写出药物、剂量和给药频率(参见 1801；18．2)。
调查1
你单位的IAcuc对包括非存活手术的方案要求提供哪些信息?
● 没有执行非存活手术 30/130
● 对手术操作进行梗概捕述 6/130
● 对手术操作中的基本要素做出描述 63/130
● 对手术操作进行详细的描述 65/130
●其他 1/130
调查2
对非存活手术，你单位的IACUC要求提供哪些麻醉信息?
● 麻醉前驱药物和麻醉药物 123/130
● 麻醉前驱药物和麻醉药物的给药剂量、途径、频率 128/130
● 麻醉的持续时间 96/130
● 是否给予神经肌肉阻断剂 88/130
● 神经肌肉阻断剂的给药剂量和途径 85/130
18.4 IACUC能否将手术操作分为大手术和小手术?按什么标准?在审查手术方案时，这样分类对IACUC有用吗?
法规要求
AWAR(§1.1)将一个大手术操作定义为“任何穿透和暴露体腔的手术或对身体或生理功能产生永久性损伤的操作”。《指南》(第61页)指出，手术操作有大小之分。一个大的存活手术是指“穿透和暴露体腔或产生严重的物理性或生理功能障碍(如剖腹手术、开胸术、开颅手术、关节置换和截肢)的手术”。小的存活手术是指“不暴露体腔和导致很少的或根本没有身体损伤(如伤口缝合，外周血管捅管，农场动物的常规手术如去势、去角和脱垂修复，在兽医临床实践基础上基于“门诊病人”基数的很多常规操作)的手术。PHs政策(Ⅳ，A，1)要求研究机构应将《指南》作为它们动物护理和使用程序的基础(参见26.5)。
观点
手术操作由IACUC根据法规划分为大或小手术。这种分类对IACUC审查方案时是有用的，因为IACUC可以根据手术的规模决定手术设施类型和所需的无菌技术的程度(参见18.13)。对非啮齿类动物实施大的存活手术时，必须是在设计合理、操作和护理能够满足动物存活要求的设施内进行。小的存活手术和啮齿类动物的所有手术不需要单独的专用设备，但必须使用无菌技术(AwAR§2．3l，d，l，Ⅸ；《指南》第62、78页)[2]。此外，对用于多次大的存活手术的动物，必须在方案中说明这样操作的科学理由并获得IAcuc的批准(AwAR§2．3l，d，l，X；《指南》第12页)。对动物多次实施小手术操作不受法规的限制，然而IACUC应利用专业知识来限制对动物进行小手术的次数。
18.5 腹腔镜是一个大的手术操作(大的存活手术)吗?
法规要求
(参见18．4)AWAR(§1．1)中将大的手术操作定义为“穿透和暴露体腔的任何外科手术，或产生永久性物理或生理功能障碍的任何操作。”《指南》(第61页)指出，大的存活手术为穿透和暴露体腔或产生严重的物理性或生理功能障碍的手术。
观点
法规并没有明确指出在大的存活手术中进入或暴露特定腔体的程度。如果手术涉及腔体的打开，那么就应该按照大的存活手术的标准进行操作。根据腹腔镜操作流程，通常至少有两个切口，一个在手术区，一个在观察区。根据操作的不同，可能会有更多切口，但是应重点考虑患病动物的福利。虽然腹腔镜技术可最大程度地减少创伤，但也会给动物带来潜在性出血的风险。此外，操作中镜头的反复进出和不熟练的操作都会增加术者和助手未注意到的污染可能性。虽然该技术可减小伤口，但由于腹腔镜设备比较难清洗和灭菌，因此会增加细菌污染的风险。
18.6 在什么情况下一个动物能多次用于存活外科手术?
法规要求
虽然不鼓励对一个动物进行多次大的存活手术，但《指南》(第12页)指出，如果研究者能说明其科学合理性并获IACuC批准，就可能允许对一个动物进行多次重大的存活手术。AwAR(§2.31)和NIH/0LAW[3]允许进行多次重大的存活手术的条件如下：
● 研究人员以书面形式说明其科学的合理性
● 当需要作为一项常规的兽医护理操作时或为了保护动物的健康和福利时
● 在个案审查的基础上，管理者、APHlS和农业部可以授权的某些特殊情况
● A PHIS／AC政策[14]进一步强调了AWAR§2.31，D，l，Ⅹ允许对一只动物进行多次大的存活手术的规定：
● 当PI在申请中说明其科学的合理性并获IACuC批准时
● 在一项包含大的存活手术的实验方案中，为使动物得到适当的兽医护理而亟需讲行一项紧急的大的手术时
● 在副主任授权的其他情况下[豁免申请递交给适当的实验动物护理区域主管，他将转发给实验动物护理副主任进行审阅，然后向副主任提出建议；每年IAcuC对免审的评价是必不可少的，且必须包括在年度报告中(APHlS表格7023)，供重新申请和继续免审时参考]
在允许对一个动物实行多个大的存活手术的法规中有允许免审的标准。根据AWAR(Sectionl3，a，3，D)，免审由农业部部长授权。但是，AWAR(§2.31，d，1．Ⅹ)指出的和NIH/0LAW标注的是[13]，免审申请应送给农业部APHlS的负责人。农业部部长已经将这份责任授权于APHIs负责人，他又授权于动物管理处副主任。根据APHIS/AC政策14[4]，申请应递交给当地实验动物管理主管，由他将其转发给实验动物管理副主任进行评审，并向副主任提出建议。
观点
在某些特殊情况下，如多次手术是一个研究项目的必要部分，或为保护稀缺动物资源，或因临床需要等原因，这时对一个动物进行多次外科手术是合理的。依据《指南》(第12页)、APHIs/Ac政策14[4]和PHS政策[3]的解释，节约成本不能作为对一个动物执行多次大的存活手术的充分理由(参见18.9)。
18.7 供应商通过外科手术改造动物以满足科研的需要(如小鼠卵巢切除)。如果动物销售给某一机构用于PHS基金支持的项目,供应商必须有自己的PHS承诺书吗?IACUC应当获得该承诺书的副本吗?(参见14.34)
观点
购买南供应商通过手术改造和销售的动物，NIH/0LAW对此尚未正式讨论。然而，NIH/0LAW已对包括商业供应商在内提出的相关方案做出了回答，如利用自己的资源生产标准试剂抗体并列人商品目录作为抗体进行销售。当抗体已经成为商品并销售时，就不要求供应商获得由NIH/0LAw[5]批准的动物福利承诺书了。根据这个原则,如果一个机构购买动物用于PHS资助的研究，销售前动物经手术改造，而没有改造过的动物已作为商品进行销售，这时供应商不需要获得NlH/0LAw批准的动物福利承诺书。另一方面，如果经研究人员授予或转包，供应商用研究人员提供的抗原或应研究人员的要求制备抗体，这种抗体被称为“定制”，那么该供应商必须有NIH/0LAW[5]批准的动物福利承诺书。该机构必须通过供应商或NIH/0LAW获得供应商的NIH/0LAW批准的动物福利承诺书编号[6]。再次根据同样的原则，如果研究人员委托动物供应商，通过外科手术改造动物专门用于PHs资助的研究，那么该供应商必须有NIH/0LAW批准的动物福利承诺书。作者认为，该机构应获得供应商的承诺书，并根据各地区机构层面上的要求，获得一份动物福利承诺书的复印件。
另一种可供供应商选择的做法是，对通过手术改造动物有需求并获得NIH/0LAW批准的研究机构可将供应商纳入自己的保证书中，即在IACUC批准的实验方案中包括了供应商的动物。此外，IACUC必须检查实验方案中包括的所有的动物养殖点，确保供应商的工作人员有执行实验方案的资质。这种做法效率低，而且随着使用这种方法的机构数量的增多，可能会有更多的问题。
18.8 IACUC是否允许农场动物在大的手术后苏醒，以便销售给屠宰场?(参见14.48)
观点
通过引用合适的条款，IACUC可以允许或否决动物从大的存活手术中苏醒。假如满足所有相关的要求，AWAR(§2．31，d，1，Ⅸ)和《指南》(第60～64页)都未禁止动物从大的手术巾苏醒。然而PHS政策(Ⅳ，C，1，a)规定“在满足实验设计的同时，实验操作要避免或减少给动物造成的不适、痛苦和疼痛。”这与AwAR(§2．31，d，l，I)中的说明是相似的。假设研究人员的研究或培训能够用非存活手术满足，则通过麻醉可以防止动物苏醒过程中承受的疼痛和不适，保障这些动物的福利，而不是使用镇痛剂来减少可能存在的术后疼痛。如果屠宰动物的肉供人类食用，那么IACuc要确保这些动物仅服用了FDA批准的药物且停药期符合要求。最后，关于公众对在研究和教学中使用动物的期望和意识，IACuC应在做决定前优先考虑，为研究而使用动物应比为其他用途而使用动物被定位在一个更高的伦理标准层面上。有关在研究或教学后再将农场动物回归到食物链的这种潜在的负面公众意识可能是IACUC决定不允许这种做法的根据。
18.9 由供应商向客户提供的卵巢切除后的仓鼠，IACUC允许其再经受另一次大的存活手术吗? 为了符合法规的要求，应该怎样考虑在同一动物上进行两次大的存活外科手术呢?
法规要求
AWAR(§2.3l，d，Ⅹ，A～§2.3l，d，Ⅹ，C)规定，除非有科学的道理证明是合理的或兽医护理的一部分，再就是得到APHIS/AC的批准，否则对任何动物都不能实施一次以上的大的存活手术(参见1 8.6)。AP HlS/AC政策16[6]做了进一步说明，强渊供应商提供的已经过一种大的存活手术的动物必须经过鉴定确认，以防止它们被用于另一个大的存活手术。《指南》(第12页)也明确指出，如果一个动物要进行多个大的存活手术，需要科学的合理证明。《农业指南》(第22页)也有类似的条款，如果：①术是在同样的实验方案中；②有科学道理证明是合理的(参见18.18)。
观点
根据目前兽医临床经验，卵巢切除术尽管使用是的腹腔镜，但因为是体腔操作，所以也划为大的手术(参见18.5)，而且切除卯巢会对动物产生永久性的生理改变。很明显认为PI仅仅出于这些动物一定会用于研究而非某一特定研究所需的原因，就未经批准订购动物的想法是幼稚的。为了基于科学价值的豁免，PI有责任说明其科学价值，并且必须足够清楚地和已经IACUC批准的科学研究联系起来。
18.10 因为一个未想到的且与任何正在进行的研究无关的自发医疗状况，兽医执行了一个大的手术操作。是否已制定了除非有科学合理的证明和IACUC批准可以进行“动物恢复后的多个大的手术”，否则禁止后续的存活手术的条款?
观点
AWAR(§2.31，d，Ⅹ，B)对种种情况做了专门说明，APHIS/AC政策14[4]也其做了解释，指出“当一项紧急的、大的手术作为适宜的兽医护理的一部分时，接了这样手术的动物仍可用于包括有一项大的存活手术的实验方案中”。假定紧急手术作不影响动物使用，则没有必要做特别说明。AV和PI有责任向IACUC说明利用这动物进一步开展研究在医疗和科学方面的适应性。《指南》(第12页)建议，还应考动物品种的可用性或其他独特的特征，使之成为另外的包括大的存活手术的研究中的贵资源。
18.11 如果研究人员在实验室工作台上对仓鼠实施大的存活手术，这符合AWAR的规定吗?
法规要求
AWAR(§1.1动物)特别将仓鼠列为一种受管制的物种。但是AWAR(§23.31，d，1，Ⅸ)指出，对啮齿类动物实施的大的手术虽然需要无菌操作，但不需要指定的设施。《指南》(第78页)指出，在实验室设置专门的区域并加强管理以减少由于其他操作造成的污染，对啮齿类动物实施手术是可行的。
观点
只要在实验台同一区域不同时进行其他实验操作，在实验台上可以进行仓鼠的存活性手术，而且只要这个环境条件可以减少实验室中其他操作造成的污染，使用实验台是可以的。除了啮齿类动物之外，AWAR规定手术者应无菌操作，也要求适宜的着装，而且由于仓鼠是一个受管制的物种，所以应该保存完整的术中和术后观察记录，使用镇静药或其他药物、疼痛评估和对手术恢复的记录。
18.12 什么是无菌操作技术?
法规要求
《指南》(第62页)指出，无菌操作技术包括：
● 患病动物的准备，包括去除体毛和手术部位的消毒
● 手术者的准备，包括手和手臂的擦洗，合适的插筒管，穿上合适的手术服装和戴上无菌手套
● 使用灭菌的设备、耗材和植人材料
● 使用有效技术，减少感染的可能性
《指南》(第62页)还指出“运用无菌技术使微生物污染降至最低水平。单独使用任何操作、仪器设备或杀菌剂都不能实现这一目标。无菌技术需要每一位手术人员的理解和配合。每一步操作的作用和重要性随着操作程序的变化而不同。”
观点
根据定义，无菌技术是一种减少患病动物接触病原微生物机会的外科手术操作[7](参见26.20)。
18.13 对动物实施存活手术时是否需要无菌技术?
法规要求
AWAR(§2.3l，d，1，Ⅸ)要求对其所有涉及的动物实施存活手术时都要使用无菌技术，包括口罩、帽子、无菌手术衣和无菌手套、无菌器械和无菌操作技术。《指南》(第62页)指出，小的存活手术“和大的存活手术相比，可以在不太严格的条件下实施，但是仍然需要无菌操作技术和无菌仪器”。
观点
IACUC负有监管责任，以确保使用规定的、可接受的无菌操作技术。对实施外科手术的区域进行每半年一次的检查可以帮助确保这一标准的落实(参见第26章)。使用无菌操作技术实施存活手术也是获得满意的手术结果、减少感染风险所必需的。无菌技术可使手术伤口和暴露组织的微生物感染降至最低水平(《指南》第62页)[8]。没有使用最佳的无菌技术可能会增加细菌污染和随后感染的风险，影响术后动物的健康。此外，缺乏术后感染的临床证据并不能排除临床上存在隐性感染。对大鼠进行的一项研究表明，感染的临床表现不明显，然而却产生了影响研究结果和使研究结果得不到认可的不良生理和行为反应[9]。
18.14 与其他哺乳动物相比。啮齿类动物的无菌操作技术标准不同吗?
法规要求
啮齿类动物的无菌操作技术标准和非啮齿类动物的不同。与非啮齿类动物手术相比，AWAR(§2.3l，d，1，Ⅸ)和《指南》(第78页)不要求有专门的手术设施用于啮齿类动物大的存活手术。AwAR(§2．3l，d，l，Ⅸ)指出，所有存活手术必须采用无菌操作技术，包括手术手套、口罩、无菌器械和无菌操作技术。《指南》(第63页)描述了啮齿类动物手术的特点，如切口小、一个人就能操作、一次对多个动物实施手术、时间较短，所以修正用于体形较大品种的标准无菌操作技术是必需的，也是值得的[8.10]。
观点
修订适用于啮齿类动物的标准无菌技术主要包括使用一套能维持无菌状态，同时能容纳至少5只啮齿类动物的灭菌设备包、穿戴合适的、带帽子的面罩和无菌手术服[8.10]。虽然修改标准无菌技术对啮齿类动物来说是必需和值得的，但是为防止或尽量减少患病动物接触病原微生物的机会以减少感染的可能性的同时不能损害动物的福利[10](《指南》第6l页)。APHlS/AC规定对于啮齿类动物需要戴口罩。如果外科医生的准备工作应该包括戴上口罩，作为“外科手术式的装束”的一个合理部分，口罩看起来也是必需的，但是《指南》并没有特别指出使用口罩是适当的无菌技术的一部分(参见26.21)。
虽然对啮齿类动物手术要求的严格程度不高，但是在研究机构层面上有理由制定比法规更严格的要求。很多实验室同时用规定的和非规定的动物，在这些实验室中，啮齿类动物在使用规定动物的手术中所占比例在不断减少。如果某人连续做5个兔或豚鼠手术，就需要使用5个单独的无菌设备包。对IACUC来说，要求对啮齿类动物执行相同的标准就是不合理的，即使法规没有这样要求。如果一个特定的IACUC制定了比法规更严格的要求，这些额外的要求应该明确界定，以使PI能以恰当的方式进行研究。
18.15 非存活手术需要无菌操作技术吗?
法规要求
当实施非存活手术时，如果动物麻醉时间不够长并出现感染迹象时，APHlS/AC政策3[11]不要求使用无菌技术或专门的外科手术设施。实施手术的地方应该干净、整洁，有适于兽医操作的卫生环境，并可作为一个标准的检查/治疗室使用。《指南》(第62页)不要求对非存活手术使用无菌技术，但“手术部位应修剪，手术者应带手套，设备和周边环境应干净”。假如非存活手术在专门的存活手术区域执行，则应使用无菌技术，或手术室在用于大的存活手术之前必须进行清洁，以达到适当的洁净级别(《指南》第62～63页)。
观点
研究人员究竟是满足非存活手术的最低要求，还是使用18.12捕述的任一个无菌操作步骤，亦或全部的无菌技术，这取决于实验方案和正在执行的手术。从专业上进行判断是必要的，以评估致病菌污染的几率和之后可能导致研究结果无效的宿主反应。Slattum及其同事[12]的一项研究证明，在实施非存活手术时需要无菌操作技术。他们发现在不使用无菌技术条件下进行非存活的心肺研究，犬患革兰氏阴性菌菌血症和败血症而休克，而在实验室准备的非灭菌静脉内用溶液中发现了革兰氏阴性菌。使用无菌技术的～些步骤，如使用商品化的灭菌盐溶液和其他无菌静脉注射、消毒设备和仪器并使用无菌手套，不会引起菌血症和脓毒性休克(参见26.4)。
18.16 在现场对野生动物实施手术，IACUC要求无菌技术应达到什么水平?
法规要求
AWAR(2.31，d，l，Ⅸ)指出，在野外现场实施的存活手术不需要专门的设施但一定要在无菌操作下进行，包括手术手套、口罩、灭菌的设备和无菌操作。《IACUC手册》[13]指出，在现场研究中，对野生动物实施存活手术时应该使用无菌操作。《指南》(第6l页)指出，当在野外实施手术时，对标准的无菌操作和外科手术技术进行修正是必需的，但不能损害动物福利。当修订的条款实施后，应该对手术效果进行全面评估，确保修订后的规程得到落实。手术效果的评估标准除了临床发病率和死亡率外还需要其他的评估标准。
观点
如果不需要改善动物福利或提高手术效果，而且没有术后并发症，从提高手术存活率或最大限度地减少疼痛和应激角度来衡量的话，在对野生动物实施存活手术时，没有必要设置一个专门的外科手术设施环境。实际上，在专用设施中对自由生活的野生动物进行手术，可能有害于动物的福利和存活。临床兽医操作所使用的设备可能适用于野生动物的现场手术[2],但一定要使用无菌技术，包括手术部位的准备(包括剃毛和消毒)，外科口罩，无菌手套、无菌手术器械、无菌的日常用品和无菌植入材料，并使用有效的方法减少感染的可能性(《指南》第62页)，以防止或最大程度减少动物感染病原微生物。蒸汽消毒或高压灭菌法是外器械消毒的首选方法。但是，使用液态化学剂、作用合适时间的化学“灭菌”法在某些野外手术设备中是必需的。最后，应通过专业上的判断来完善手术外界环境和无菌技术的应用[2]。
18.17 如果PI的实验记录显示手术没有出现术后感染而且非常成功，那么低于最佳要求的无菌技术可以接受吗?
法规要求
AWAR(§2.3l，d，1，Ⅸ)和《指南》(第62页)要求所有规定品种的存活手术要在无菌条件下实施，这与18.13所述的及18.12中定义的专业上可以接受的标准相一致。
观点
不可以接受。作者和其他学者认为[14]，IACUC和AV审查和批准了这个程序,同意在达不到最佳要求的无菌技术条件下实施存活手术，这说明审查不够全面或研究人员在无菌技术培训方面是欠缺的。IACUC在确保使用可接受标准实施无菌技术方面没有履行职责。
无菌技术可在最大程度上将手术伤口和暴露组织受到微生物污染的机会降到最低[18](《指南》第62页)。使用达不到最佳水平的无菌技术可能会增加细菌污染和术后感染的风险，损害动物的健康。缺乏术后感染的临床证据并不排除造成临床上隐性感染的可能性。对大鼠进行的一项研究表明，感染的临床表现不明显，然而产生了影响研究成果和使研究结果得不到认可的不良生理和行为反应[9]。
当然，很难与成功案例去抗争。在某些情况下，只要动物健康不受到损害并得到IACUC的批准，达不到最佳水平的无菌技术可能也是可以接受的。虽然IACUC应重新考虑其批准的无菌技术以满足目前可接受的、适当的兽医护理，但IACUC选择关注结果而不是过程[14]。
18.18 在现场对农场动物进行手术时，IACUC要求使用无菌技术吗(如站在牛舍里实施瘤胃切开手术)?
法规要求
AWAR(§2.3l，rl，1，Ⅸ)指对于生物医学研究中使用的农场动物，在现场环境中实施的存活手术不需要专业的设施，但必须在无菌条件下实施，包括口罩、帽子、无菌手术衣、手套、无菌器械、无菌操作技术。PHS政策(Ⅳ，A，1)指出，在使用农场动物进行医学研究时，要遵守《指南》所列出的存活手术的标准。《指南》(第61页)指出，在实施现场手术时，可能需要对标准的无菌手术技巧进行修改，但动物福利是不能妥协的。当实施修改的标准时，通过对手术结果的评估，确保修订后的程序得到落实。手术结果的评估标准除了临床发病率和死亡率以外，还需要其他的评估标准。
当使用农场动物进行农业研究时，存活手术的标准应按照《农业指南》中所提出的标准执行[5]。《农业指南》(第2l页)指出“主要的存活手术应在专门设计适用于手术的设施中进行，并采用标准的无菌手术操作”。标准的无菌操作技术包括戴帽子和口罩、穿隔离衣、戴手套、使用无菌器材，以及相应的手术准备区和隔离区。小的存活手术是指不暴露体腔、造成小的或没有身体损伤的手术(如伤口缝合和外围血管捅管)，如果按照标准的兽医操作，可在较宽松的条件下进行。有时在不具备无菌条件的农村需要进行治疗和紧急手术(如剖腹产、气胀、皱胃移位调整时)，但应陔尽一切努力确保在卫生和无菌的环境下实施小的和紧急的存活手术。
观点
“野外环境”的家畜用于选择性的大的手术时，应在专门的设施并保证手术在无菌条件下进行，包括帽子、口罩、无菌手术衣和外科手术手套、无菌器械和无菌技术(参见1 8．12)，因此不应该在牛舍进行瘤胃切开术。小的存活手术需要无菌设备和无菌操作技术。当治疗手术和急诊外科手术不允许将动物运输到专用手术设施时，使用的手术设施应保持清洁，采用无菌技术并将动物感染病原微生物的可能性降至最低。
18.19 IACUC如何确认实施手术人员的资格?
法规要求
PHS政策(Ⅳ，c，1，f)和AwAR(§2．3l，D，1，Ⅷ)都赋予IACuc职责来确定实施手术人员的资格并接受培训。《指南》(第61页)指出，对研究用动物实施手术的人员应具有广泛的教育背景，需要接受不同层次和类型的培训，以确保掌握良好的手术技术。
为协助AV及IACUC制定适当的培训方案，外科研究院(Academy 0f surgical Re-search，ASR)编辑出版了与手术人员的正规教育和培训背景相当的科研手术培训准则[16]。研究机构也应对手术结果进行深入和持续的评估，以确保手术能够按照适当的程序实施(参见21.13)。
观点
我们的目标是在IACuC批准实验方案之前对术者的能力做出评估。IACUC应审查个人教育、培训和相关证书，常规外科手术的能力和经验，以及执行特定手术的资格之前提到的外科研究院的培训规程[16]可用来评价一个人的教育背景，用以确定一个已经知道了什么。例如，对在外科领域训练有素的医生来讲，期望他能在他擅长的领域范围内进行动物手术。然而，他/她可能需要在解剖、麻醉、镇痛和术后护理方面接受不同种间变异的培训。如果外科医生参与的是一个多学科团队共同执行的特定手术，其中包括经验丰富的动物专家，则可以不用进行正规的培训[2.16]。为了保证外科医生的能力，lACUC要求实验动物兽医至少需要观察或协助第一次手术，并协助进行后续的操作，直到获得能力，特定手术操作达到兽医预期满意的效果。虽然没有能力保障的证据，但最好的凭证是对特定品种成功实施手术的文件记录，证明手术和术后并发症少[18]。有了这样的文件，就不需要再进行培训。一个手术实验方案经IACUC批准后,应继续进行手术结果的评估。在实验动物兽医、动物护理人员、手术技术员和研究人员参与和投人中，需要确保持续使用适当的程序，采取必要的措施处理并发症、评估其发生率和进行必要的校正。
18.20 围手术期护理是如何定义的?
观点
围手术期护理包括与外科手术相关的所有事件[2]。围手术期的护理程序包括三个互有重叠的部分：
● 术前计划和管理
● 术中护理
● 术后护理
围手术期护理方案的详细说明已经出版[2.8.19]。术前计划应包括：
● 在术前计划中，确定由多个学科人员组成的手术小组
● 人员培训的需求和作用
● 所需的设备和供应品
● 实施手术的设施
应制定麻醉方案，包括麻醉药物、麻醉技术和麻醉监控方法。手术计划应包括无菌技术(参见18.12)和闱手术期抗生素指标的评估。应列出术后护理计划和术后恢复的空间和设施[2.8.19] (《指南》第6l页)。手术前的管理包括[2.19](《指南》第61页)：
● 术前通过体检和指定实验室检查来评估动物健康
● 手术前，动物对新的环境要有一段适应时间
● 术前对手术用特定品种是否需要进行一定时问的禁食
● 术前进行药物处理或服用抗生素术中护理包括[2]：
●监控麻醉水平和重要器官的功能
●保护重要器官的预防措施，如肠外输液、补充氧气、维持体温
●适宜的手术技术包括：
● 温和地处理组织
●有效地止血
● 为组织维持充足的血液供应
● 无菌
● 精确对合组织
● 正确使用手术器械
● 监视设备的适当使用
● 敏捷的手术操作
手术后可分为三个互有重叠的阶段：麻醉恢复、急性术后护理和术后长期护理[2]。在麻醉恢复和急性术后护理期间，需要经常评估体温调节、心血管和呼吸系统功能。可能需要另外的护理，包括：
● 检查手术切口
● 提供热源以防止体温低
● 给予肠道外液保持水化合作用
● 使用止痛药，预防术后疼痛
● 使用预防性抗生素和其他药物
在麻醉恢复和生理稳定期间要进行长期的术后护理，要求至少每日监测一次，直到拆线(通常在术后lO～14天)，需要解决所有的术后并发症。需要对生命体征、水化合作用、饲料和饮水的摄人量、大小便情况、状态和活动、手术伤口状况、体重，以及术后疼痛的状况和感染情况进行监控。应该注明特殊饮食、止痛药、包扎、抗生素及其他药物的使用情况。拆线后，术后护理取决于动物品种和外科手术情况。如慢性导管或其他部分植入腹腔手术需要持续的监测和护理。在整个术后期中应安排监测体重[2]。
18.21 与非啮齿类动物相比，啮齿类动物围手术期护理应达到什么水平?
观点
(参见18.20)对非啮齿类动物和啮齿类动物来说，围手术期护理方案的总体构成是相同的，然而有一些程序是不同的。对于啮齿类动物的外科手术，其“团队”也许可以减少到只有一个人，他可以扮演外科医生、麻醉师、手术技术员和助理护士。当一个医生在一个操作台上实施多个动物手术时，多数是啮齿类动物手术。为确保手术中的用品和设备齐全，必须做好术前计划，并对标准化无菌技术做出必要的修改[8.10] (《指南》第63页)。术前动物健康状况评定应该包括供应商提供的群体健康检测(如血清学)和眼观检查，而不是在接收动物时对每只动物进行身体检查[2]。设施内哨兵动物的血清学检测结果或其他健康检测结果有助于对动物健康做出评价。
根据科学研究的需要，有许多精密的方法可用于对麻醉的啮齿类动物进行术中监测，但这些方法可能不实用或在许多研究情况下不能使用。通过简单地观察胸壁运动以确定呼吸频率和通过胸壁触诊心尖搏动可以充分地评估心血管和呼吸系统的稳定性[20]较大品种术中重要器官的维持，如静脉输液治疗术对啮齿类动物是很困难的，可能需萼通过注射液体或其他方法来维持循环血量[2]。
对处于麻醉恢复期的大型动物进行监测和维持治疗同样重要，对啮齿类动物来说急性术后护理是不实际的和不可行的。此外，经常发生的一次同时对多个动物实施手术的情况需要开发同时对多个动物进行麻醉复苏的方法。
18.22 在向IACUC提交的涉及围手术期护理的实验方案中应提供多少细节?
观点
作者认为，关于围手术期护理细节应在IACUC实验方案中提出，包括以下方面：
● 姓名、资历和参与人员的职责，包括外科医生、管理和监测麻醉的人员和进行术后护理的人员
● 进行手术的地方
● 禁 食持续时间，禁食超过24h的理论依据
● 围手术期用药和抗生素；剂量、体积、用药途径和用药频率；治疗的持续时间
● 术中检测和用来评估麻醉水平的方法
● 如果注射神经肌肉阻断剂，相应的外科手术麻醉监控系统
● 使用无菌技术
● 麻醉后复苏及术后恢复期间的动物监控频率
● 术后监控与护理
● 在研究机构的IACUC手册中，符合术后监测与护理指南的指示
● 指出预期的健康状况变化或可能发生的术后并发症，以及对于监测和护理方法的说明
● 术后镇痛药的给予；药品、剂量、给药途径及给药次数；需求镇痛药的决定标
准(参见18.31)
调查
在IACUC实验方案中、下列哪些项目是关于围手术期护理的?(可多选)外科手术前
● 参与人员的姓名资历或有关参与部门的人员资质 121/175
● 实施和监测麻醉的人员的姓名 94/175
● 外科手术地点 125/175
● 术前药物及抗生素；给药剂量、给药体积、给药途径、给药频率；治疗疗程：禁食持续时问 108/175
● 捕述术中检测和用来评估麻醉水平的方法 113/175
● 若给予神经肌肉阻断剂，对外科麻醉检测的描述 82/175
● IACUC文件规程或对无菌技术的要求 118/175
外科手术后
● 动物麻醉恢复的安置地点 112/175
● 麻醉苏醒过程中对动物监测的频率 116/175
● 术后护理期间的监测频率 108/175
● 术后护理人员 101/175
● 术后监测和护理的描述 112/175
● 预期健康状况的改变或可能的并发症标志，以及对护理方法的描述 97/175
● 术后镇痛剂的使用，包括给药剂量、途径和给药频率 114/175
18.23 过期的药品可用于存活手术吗?
法规要求
APHIS/AC政策3[11]指出，使用过期的医用品如药品，是不可接受的兽医实践，并且不是适当的兽医护理。政策3特别指出，过期的麻醉剂、镇痛药和紧急用药不能用于任何规定的动物来实施大的存活手术。
观点
作者认为，任何过期的药品和注射液都不能应用在动物的外科手术中。不管计划的手术程序是如何规定的，过期的麻醉药、镇痛药、安乐死及紧急用药都不允许使用。药理作用的缺失可能引起疼痛感加剧或其他不可预知的麻醉问题。使用者对注射药物有信心是适当兽医治疗的基础，不使用过期药物才是最好的保证。
调查
你单位的IACUC认为过期药物在外科手术中使用是可接受的吗?
● 不适用 15/163
● 能接受 2/163
● 不能接受 141/165
注：最后一个问题分母的差异是由于收录了早期的调查数据。
18.24 在非存活手术中能接受使用过期药物吗?
法规要求
APHIS/AC政策3指出，如果“该药物的使用未对动物福利造成损害或未影响科学研究的有效性”[11]，那么除麻醉药、镇痛药及紧急用药外，过期药品可以使用。动物中心应该有书面规定说明在非存活手术中可以使用过期药品，或要求研究人员在递交的IACUC实验方案中写明过期药品的使用情况并等待批准[11]。
观点
在没有供应商提供的安全有效的书面文件时，研究人员提出在非存活手术中使用试剂的书面申请没有得到IACUC批准时，不得在非存活手术中对动物使用过期药品和注射液。
调查
你单位的IACUC允许在非存活术中使用过期药物吗?
●不允许 102/158
●允许．在IACUC许可的围内 9/15
●在任何条件下都允许 11/158
●不适用 15/158
●其他 11/158
18.25 IACUC要求提供实验用缝合材料类型的信息吗?
观点
PI应在实验方案中描述缝合材料类型和伤口缝合方法，以确保它们用在不同品种动物和外科手术切口中是适合的。为了促进伤口愈合，缝合皮肤的材料应最大程度地减少组织的反应和可能的伤口感染。例如，引起健康皮肤产生病变需接种至少107个金黄色葡萄球菌，但在丝质缝合线存在的条件下，所需的接种量则少于103个细菌[21]。缝合线所产生的毛细管作用，加上伤口本来难以保持清洁状态，增加了手术部位感染的几率[19]。
在埋线时应考虑使用适当的缝合方法，以防动物咬或蹭暴露在外的皮肤缝线。
调查
关于伤口缝合和缝线材料的问题，你单位的IACUC要求在实验方案中提到以下哪些问题?
● 切口位置和长度 103/160
● 涉及的器官 111/160
● 使用的仪器 77/160
●使用的缝合材料类型 98/172*
●皮肤或暴露伤口的缝合方法 117/172*
●缝线将被拆除的时间 97/160
●未完成的大的存活手术 28/160
●其他 18/160
*这些数据包括本书第一版的调查数据。
18.26 必须时．IACUC要求提供什么时间去除缝线(或夹子)的信息吗?
观点
在各机构的IACUC手册中，应向调查人员提供缝合线、缝皮钉及夹子去除的适当时间，其中应包含术后护理的指导。根据规程的要求，PI应通过阅读方案表格中的书面说明和应遵守的术后护理指南以确保何时拆除缝合线的信息，而不是重申什么时候去拆除缝线或夹子。如果没有可供PI参考的书面IACUC指南，那么IACUC应要求PI在实验方案中说明什么时候拆除缝线或夹子。
18.27 IACUC要求提供术中和术后如何给啮齿类或其他小动物保暖的信息吗?
观点
啮齿类动物和其他小动物的体表面积与体重比率大，如果在手术中和麻醉复苏期没有足够的热量供应，很容易因热量流失导致体温降低。维持正常体温可显著降低由于麻醉引起的心血管及呼吸紊乱(《指南》第63页)，并且是啮齿类动物从麻醉中苏醒的关键因素[20]。各机构的IACUC在手册中应向研究人员提供抵抗低温的方法，其中应包括啮齿类动物术中及术后护理的指导。作者单位要求，围手术期观察和护理作为特定动物品种培训的一部分，其中也包括啮齿类动物。如果要求PI遵守本单位的指南，考虑到维持动物体温，那么PI应该在实验方案中进行说明，这对提供保温措施很重要。如果PI无法采用IACUC手册所捕述的抗低温方法，那么IACUC应要求PI在实验方案中指出如何在术中及术后对啮齿类动物或其他小动物进行保温。
18.28 IACUC要求提供术后观察频率的信息吗?
观点
术后观察的频率取决于手术性质和复苏阶段[2]。应该在包括术后护理要求的IACUC手册中为研究人员提供术后观察最小频率的指南。从研究人员提供的书面实验方案中，可以看出他/她已经阅读并遵守这些准则，保证术后的观察频率。然而，若一个手术需要比指南中建议的更高频率的观察，那么在实验方案中应描述监测频率和监测环境。如果PI没有可参考的书面IACUC指南，IACUC应要求PI在实验方案中提供术后观察频率的信息。
18.29 什么时候认为动物已得到充分的恢复并可放回笼内?
观点
许多生物医学科学家认为，在完全从麻醉中苏醒、各项生理指标稳定并已重新具备了正常走动和保护行为之前，动物应留在恢复区[2.22.33]，但实际情况与动物品种及大小有关。做了开胸手术和关节镜手术的动物，它们的生理稳定性和正常走动行为可能有很大区别。作者单位要求，动物在拔去管子、基础体温恢复37.2℃C前，须一直有护理人员的照顾，并且静卧休息。
过早的给予镇痛药可能导致术后动物的昏迷。然而和注射安定剂不同，用过麻醉药或镇痛药的动物对非疼痛的刺激会有反应(如干呕)。保持正卧的姿态有利于动物抬头，能有效地防止术后呕吐。抬头也是一种安全防护能力，如当动物喝水时，抬头可防止鼻孔意外地浸在水中。
18.30 多数动物术后是在笼子里恢复的，那么是否有必要设置单独的恢复区?
法规要求
《指南》(第79页)指出“术后恢复区应能满足动物在术后麻醉状态下和术后立即恢复的需要，还应考虑到方便对动物的观察”。动物品种和手术类型将决定笼子和所需相关设备的类型，应考虑到保持动物生理功能的需要，如体温和呼吸。
观点
在麻醉复苏期间，动物所处环境应是温暖、安全、安静、舒适的，并且和动物个体与品种相适应[24]。应为不同种类的动物，如兔、猫、犬及猪等提供专属的恢复空间[33]。独立恢复区创造了必要的物理环境、温度控制、一些监测和相关护理设备，以处理恢复期可能发生的并发症。动物可圈养在专门设计的、大小合适的笼子里以防受到伤害。独立饲养也可保护动物免受同伴的伤害。另外，设立恢复区便于工作人员对动物的适当监测。
小反刍动物因体型太大而不适合恢复笼，大体型农场动物可以在围栏或畜栏中恢复．这些地方温暖、安全且便于观察[2.33]。这样做的好处是相同的气味、声音、视觉有助于动物的恢复。在地板上铺上泡沫或填料有助于动物保温和安全。围栏或畜栏可提供宽敞的空间，方便大动物恢复期间变换姿势、移动身体。尽管场地不同，18.29提到的标准还是适用的：在动物能趴着休息，基础体温至少37.2℃并在拔出插管之前，需要对动物进行监护。
通常啮齿类动物在手术室中从麻醉中苏醒[23]，应补充食物来维持体温，这对啮齿类动物能够成功地从麻醉中恢复过来是至关重要的[30]。处于恢复中的啮齿类动物通常单独圈养，以防止同笼动物的伤害。虽然做不到全面监控，但在动物回笼之前，应该经常观察动物，确保动物从麻醉中恢复过来并保持稳定。
18.31 在手术和围手术期间。研究人员应做哪些记录?
法规要求
对于APHIS/AC政策3[11]所涉及的动物，要求研究人员按照认定的兽医程序做术后记录。《指南》 (第62～63页)指出，在麻醉恢复中和苏醒后都应做适当的医疗记录。
观点
医学记录所要求的特定信息参见26.10和27.16。《IACUC手册》[13]指出“应保存手术操作中的麻醉监测记录，并将术者报告作为动物记录的一部分一并保存。此记录应提供给术后护理人员。此记录最少要说明动物在拔出插管之前接受治疗并恢复站立能力的情况。此外，还应补充记录以下情况：评价动物恢复的情况，服用镇静剂和抗生素，基本生命体征，感染、伤口护理和其他医学观察的监控记录”。
术前记录应包括供应商提供的动物健康概况、用药和疫苗接种史(在适用的情况下)等内容，以及由临床护理人员在隔离检疫期或年度更新时所做的补充记录(在适用的情况下)。其他附加的信息包括猫或犬的疫苗接种、每季度或半年一次的血液检查．还有非人灵长类动物结核病检测和血清学检查的档案。应通过体检对动物健康状况做出评价。麻醉前的评价应包括动物体重、体温、心率及呼吸频率等记录以建立基础数据．要认识到这些数值可能会受围手术期或前驱麻醉药物的影响。是否需要做诊断放射学检查和血液、尿液、粪便的实验室检验将依赖于动物品种、实验方案和动物个体或群体的健康史[2]。术前给药或抗生素情况也应存档。
麻醉档案应记录麻醉给药、麻醉深度的监控(包括检查条件反射)，以及经常评价动物的体温、心血管功能、呼吸功能等生理状态[25]。记录的内容范围和监控的复杂程度与麻醉方法、手术及与动物品种有关的并发症有关[2]。档案中至少应包括体温、心率、呼吸频率等生命体征，平均每隔15min记录一次，还包括服用的麻醉药物、剂量、给药途径和给药时间。术后时期可分为三个互有重叠的过程：麻醉恢复期、重症监护和长期术后护理[2]。在术后阶段，记录的内容和术后监控的强度与动物品种手术有关，通常在麻醉恢复期需要高频率的监控，因为“这时动物最容易受到麻醉剂、低温和继发性术后生理紊乱这些副作用的影响”[23]。在麻醉恢复期间和术后紧急护理期间，应该频繁地进行对体温调节、心血管及呼吸功能的评价工作，直到动物足够稳定。对那些重要的生命体征，包括体温、脉搏及呼吸频率和节律、血氧饱和度等，应约每15min记录一次。在麻醉恢复的过程中，如果动物病情趋于稳定可减少监测频率。临床观察包括黏膜颜色、毛细血管充盈时间、疼痛评估和手术伤口情况。应记录镇痛药、抗生素、非口服药液及其他药物的注射情况，包括药物名称、剂量、给药途径和给药时间。对外科手术的简要描述应包括在术后护理档案中或作为一个单独的手术报告进行保存，其中应包括对并发症的捕述和(或)对获批手术计划的偏离认可。
在恢复和生理指标稳定后很长一段的术后护理期内，需要每天至少进行一次监测，直至拆线(一般为术后10～14天)和治愈所有的术后并发症。记录生命体征、水化合作用、摄食饮水、排便排尿、姿势和行为评估、疼痛的评估、手术创口情况及护理、术后感染监测等。术后护理和药物注射都应与麻醉恢复的描述一同存档。拆线后监控的频率和参数取决于动物品种和手术程序，如慢性导管或其他部分植人物需要记录持续监测和护理的情况。在整个术后期间都应对体重进行监测(参见26.1l～26.15)。
18.32 怎样才能认为健康记录“符合目前的兽医实践”，以及如何使用这些记录?
法规要求
对于APHIS/AC政策3[11]所涉及的动物，要求研究人员按照认定的兽医程序做术后记录(参见18.31)。
观点
对动物健康记录而言，可以单独的或与其他问题叠加的方式对某个问题或观察情况进行捕述，如手术计划、解决方案或缺乏的原因。它只是一种交流工具，允许受过各种培训的人员与患者以一种有意义的方式互动，使护理团队知道过去做了些什么、为什么要这样做．以及为什么一个预期结果可能实现或不可能实现。这是临床护理人员和受过相关培训的医生／外科医生之问的一种可靠的交流机制。在科研条件下，特别是对新型动物模型，发生意外死亡的原因都可通过查询记录在案的动物健康档案来了解。精心组织和记录动物健康归档，能使大家达成共识，这是做好研究的关键(参见26.10～26.15；27.16～27.21)。
曲连东 译常在 贺争鸣校
