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兔抗狨猴IgG⁃HRP标记抗体的制备及初步鉴定

2018年08月06日 浏览量: 评论(0) 来源:中国比较医学杂志 2018年第6期 作者:丛日旭 刘先菊 滕永康 向志光 佟 巍 张丽芳 阮研硕 刘云波 责任编辑:admin
摘要:狨猴血清中纯化 IgG 抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中 IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴 IgG。

目的:狨猴血清中纯化 IgG 抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中 IgG,HRP(辣根过氧化物 酶)标记兔抗狨猴 IgG。

方法: HiTrap TM Protein G 亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清 IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS⁃PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法( double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴 抗血清效价,改良“简易过碘酸钠标记法”制备兔抗狨猴 IgG⁃HRP 标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白 免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴 IgG⁃HRP 标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。

结果:狨猴和兔抗 狨猴血清纯化 IgG 纯度分别大于 95% 、97% ;兔抗狨猴 IgG 抗血清的效价为 1∶ 64。 ELISA 和 Western blotting 鉴定了 兔抗狨猴 IgG⁃HRP 酶标抗体参考工作浓度为 1∶ 256 000、1∶ 15 000,特异性明显。

结论:制备狨猴 IgG⁃HRP 标记抗 体并初步鉴定,包括 ELISA 及 Western blotting 的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学 检测体系储备了资源。

 

 

全文阅读:兔抗狨猴IgG?HRP 标记抗体的制备及初步鉴定

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