目的：探讨microRNA⁃494(miR⁃494)通过Toll样受体⁃4(TLR⁃4)通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制｡

方法：选用小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1作为体外模型,采用miR⁃494mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E 采用qRT⁃PCR法测定miR⁃494在小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1转染前后的表达情况;通过MTT法检测转染前后小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1的增殖情况;通过测定碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性,研究小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1的分化情况;通过骨钙素(osteocalcin,OC)定量检测分析和VonKossa钙化染色检测小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1的基质矿化情况;通过Westernblot等检测转染前后TLR⁃4蛋白的表达差异｡

结果：qRT⁃PCR测定结果显示,与阴性对照组相比,小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1转染后的miR⁃494的mRNA的表达量升高(P<0.05),说明miR⁃494mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E 成功使miR⁃494过表达｡与阴性对照组相比,经过miR⁃494mimic转染后,小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1的增殖能力受到抑制(P<0.05)｡转染后的小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1中ALP的活性降低(P<0.05)｡同时,转染后的小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1中OC的活性显著降低(P<0.05),矿化结节的数目､减少(P<0.05)｡Westernblot结果显示,与阴性对照组相比,miR⁃494mimic转染组细胞中的TLR⁃4蛋白表达量显著升高(P<0.05)｡

结论：miR⁃494能够通过TLR⁃4通路抑制小鼠成骨细胞株MC3T3⁃E1的增殖活力,降低细胞中ALP､OC的活力,减少成骨细胞中的矿化结节数,抑制成骨细胞分化及基质矿化｡

全文阅读： microRNA⁃494通过TLR⁃4通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制