小鼠非手术胚胎移植技术
小鼠是发育生物学和生殖生物学研究的重要模式动物,其胚胎移植技术是体外受精、嵌合体、转基因、克隆、胚胎冷冻种子库等研究的关键环节。目前,我们成功建立了小鼠非手术胚胎移植技术,利用该技术将3.5天的囊胚移植假孕2.5天的小鼠子宫,平均73%的囊胚可以发育至成活新生儿,该技术比手术法胚胎移植简便、快捷、只需几十秒钟就可完成操作过程、节省费用、不需手术、不易感染、无痛苦、符合实验动物福利原则,而且也可用于子宫药物处理以及其他大动物和人类胚胎移植的研究。其实验步骤如下:
一 胚胎准备:在60mm的培养皿上做50微升的M2培养滴,将准备好的囊胚5-10枚一组放在各个液滴中。
二 吸取胚胎:将导管装在2.5微升的移液器并调至1.0微升;半压移液器的按钮;将导管前端深入M2液滴中,在解剖显微镜下观察并吸取胚胎,吸取成功后,将导管移出M2液滴,保证吸取的液体不超过3mm;轻轻敲打导管以在前端做一个1mm的气泡,如果未出现气泡,也可以缓慢调节移液器至1.1微升。
三 受体准备:麻醉,受体母鼠注射0.4-0.5mL,1.25%的阿佛丁(0.2mL/10g体重);固定,用食指和拇指抓住小鼠尾根,另外三个手指按住其臀部,并将其向上翘起;开膣,用开膣器打开外阴部,将纤维冷光纤打开,观察子宫颈开口。
四 移植:将吸有胚胎的导管送入子宫颈口,其弧度沿着小鼠背部,当导管的基部到达开膣管一半的位置时,轻轻按压并慢慢旋转移液器,按到最底部,将胚胎全部打入子宫,慢慢抽出移液器,待抽出一半时松开按压的手指,最后在显微镜下检查导管以确定胚胎是否移入。
五 将受体母鼠放回鼠笼
操作视频
河北农业大学动物科技学院胚胎实验室
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