CRISPR/Cas9系统介导Slc6a6基因敲除大鼠的繁殖与鉴定
2019年06月26日
来源:中国比较医学杂志2019年第5期
作者:仝慧慧 齐浩铭 王辰 莫丽冬 范维佳 徐立霞 么秀华 夏一鸣 黄慧玲
责任编辑:admin
摘要:利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除 大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型。
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除 大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型。
方法:针对 Slc6a6基因第5 外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA, 被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除。 通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型。 利用 Real-time PCR、Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的 mRNA表达和蛋白表达,建立 Slc6a6 基因敲除大鼠模型。
结果:F3 代出现 21 只 Slc6a6 基因敲除纯合子 (TauT-/-),54只杂合子(TauT+/-),27只阴性(TauT+/+),F3 代纯合率约为20.59%,基本符合孟德尔遗传定律。 Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,TauT蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠。
结论:本 研究利用CRISPR/Cas9系统定向敲除 Slc6a6基因,成功构建 Slc6a6基因敲除大鼠模型。
上一篇:基于Tet-On系统构建Alb启动子调控猪uPA转基因表达的慢病毒载体[ 06-25 ]
下一篇:科学家比较人脑和猴脑对音乐及语音反应[ 06-26 ]
相关文章
- 没有相关内容!
编辑信箱
欢迎您推荐或发布各类关于实验动物行业资讯、研究进展、前沿技术、学术热点、产品宣传与产业资源推广、产业分析内容以及相关评论、专题、采访、约稿等。
我要分享 >对不起,暂无资料。
热点资讯
- 年
- 月
- 周