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利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎
2019年07月31日
来源:中国实验动物学报2019年第3期
作者:李昊 陈胜男 李松美 朴善花 安铁洙 王春生
责任编辑:admin
摘要:通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9 小鼠动物模型奠定基础。
目的:通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9 小鼠动物模型奠定基础。
方法:设计小鼠 Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建 肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将 Rosa26sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚 胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与 Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚 胎,通过PCR检测整合情况。
结果:体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编 辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得 Rosa26基因编辑胚胎,经移植获 得 Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。
结论:利 用CRISPR/Cas9技术,成功获得 Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利 用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础。
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