内镜由于其独特的结构特点，较难进行清洗消毒，存在引发患者交叉感染的隐患，因此常规开展内镜清洗消毒效果的监测，评价其消毒是否达标尤为重要。《中国药典》2015版要求使用薄膜过滤法对纯化水微生物限度进行检查，该方法在《医院消毒卫生标准》（GB 15982—2012）消毒后内镜的监测中亦有提及，50mL洗脱液量比10mL能更充分接触到内镜的内表面，结合直接接种法、薄膜过滤法和菌落计数将更客观且科学有效地评价内镜消毒质量。下文将对薄膜过滤法在内镜清洗消毒效果的监测加以介绍。

规范要求：

   《软式内镜清洗消毒技术规范》（WS507-2016）要求消毒内镜应每季度进行生物学监测，《医院消毒卫生标准》（GB 15982—2012）描述的消毒后内镜采样方法为薄膜过滤法：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL~20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数（CFU/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜（0.45μm）过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数。

当滤膜法不可计数时：菌落总数（CFU /件）＝m（CFU /平板）×50

式中：m为两平行平板的平均菌落数。

当滤膜法可计数时：菌落总数(CFU /件）＝m（CFU /平板）＋mf（CFU /滤膜）

式中：m为两平行平板的平均菌落数；mf为滤膜上菌落数。

所需仪器：

    滤膜采样法在内镜采样中所涉及到的仪器材料有细菌过滤器或微生物限度检测仪（配有滤器）和0.45μm滤膜。

   细菌过滤器：由真空泵系统、收集瓶、连接管、过滤架、过滤杯、火焰灭菌器等组成。

   微生物限度检测仪：由过滤排液箱体、火焰灭菌器、过滤杯共同组成。

   过滤杯（滤器）：市售有不锈钢材质和改性PP材质的滤杯，均可采用湿热灭菌和火焰枪快速灭菌。

   滤膜：《中国药典》规定，无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约为50mm。0.45μm的滤膜过滤能力可达99.99%以上，且较0.22μm滤膜对微生物的损伤较小，更利于微生物的恢复和培养。市售的0.45μm滤膜有47mm和50mm两种直径。注意，滤膜使用前应预先灭菌。

工作原理：

    采用真空泵负压抽滤原理，在滤杯内的微孔滤膜（使用前灭菌）上下面产生一个压差，滤杯内的受试品由于压差作用通过微孔滤膜。微孔滤膜具有复杂的蜂孔结构，即使0.45μm以下的微生物亦可被拦截，从而高效地回收微生物，将受试品中可能存在的微生物截留在滤膜上。0.45μm滤膜的孔径利于微生物恢复，且培养基易透过滤膜，利于细菌培养。

微生物限度检查法步骤：

1. 取出灭菌好的滤杯与主机相连，确保密封完好；

2. 将采用直接接种法后的剩余洗脱液注入滤杯内，通过真空泵负压抽滤，滤杯内的洗脱液由于压差作用通过微孔滤膜（使用前灭菌），将洗脱液中可能存在的微生物截留在滤膜上；

3. 取下滤杯，用无菌镊夹取滤膜，转移至配置好的固体培养基上，菌面朝上，平贴，滤膜应与培养基完全贴合，不得有气泡（气泡处会影响微生物的生长）；

4. 盖上培养皿盖子，将培养皿置于36℃±1℃恒温培养箱内培养48h并计数；

5. 操作结束后，切断电源。