一、实验目的

建立一种树鼩脊髓半横断损伤模型和后肢运动功能缺损评价方法。

二、实验原理

利器切割造成脊髓半横断损伤。

三、实验材料与方法

(一)实验材料

1.所需设备  全自动消毒锅。电热恒温鼓风干燥箱。

2.所需试剂  水合氯醛粉，0.9％氯化钠溶液，医用碘伏消毒液。

3.试剂配制  3.6％水合氯醛溶液：称取3.6g的水合氯醛粉溶解于100ml灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混匀即可。室温保存。

4.实验动物  雌性树鼩，体重(110±10)g。

(二)实验具体方法和操作步骤

1.hSCI模型制备

(1)麻醉：以3.6％水合氯醛腹腔注射(1mL/100g)进行麻醉。

(2)备皮：麻药起效后用电动剃毛刀剃除树鼩胸背部毛发，胶带固定四肢于方形木板上。

(3)消毒铺巾：医用碘伏消毒液常规消毒胸背部皮肤。铺无菌孔巾。

(4)脊髓节段定位：鼠鼩颈椎7个，胸椎13个，腰椎6个，第6腰椎棘突明显向后背部突出，以此为标志向头部顺数棘突可确定T10棘突。或者从第13根肋骨往上数至第10根肋骨，其对应的棘突即T10棘突。

(5)暴露T10脊髓节段：以T9～T10联合棘突(从第13根肋骨往上数至第10根肋骨，其对应的棘突即T10棘突)为中心，切开一长为2cm的皮肤切口，钝性分离两侧脊柱肌，暴露T9～ T10棘突和椎板，有齿镊夹持T8棘突，尖嘴咬骨钳咬除T9～T10棘突和椎板，暴露出T10脊髓节段，注意不要损伤硬脑膜。

(6)T10脊髓全横断：用尖刀沿脊髓后正中沟垂直刺下抵达椎管前壁，再沿椎管前壁划向左侧，切断T10左侧半脊髓，棉球止血。

(7)关闭切口：依次缝合深筋膜和皮肤，关闭切口。

(8)术后护理：术后腹腔注射青霉素20万U/0.2ml预防感染，每天一次，连续3d。人工挤尿护理，每天早、中、晚各一次。分笼饲养，定时给水、喂食，自然光照，通风。

2.行为学评价  采用BBB运动功能评价量表(表12-1，共21级)分别于损伤后1d、3d、5d、7d,9d、11d、13d、15d对T10脊髓左侧半横断后左侧下肢运动功能缺损情况进行评定，评分时将动物置于无障碍物的面积足够大的平台上，观察其后肢的行走及肢体活动5min(评分细则见表2-1)。

(三)实验操作中的注意事项

(1)树鼩椎骨相对大鼠而言比较硬，咬除棘突和椎板暴露脊髓过程中需要特别仔细，以免横断前损伤硬脊膜和脊髓。

(2)树鼩体型较小，皮肤菲薄，损伤术后抵抗力差，术后饲养笼底部垫一层木屑，起到保暖及预防压疮的作用。

四、实验结果

(1)树鼩T10左侧脊髓半横断损伤术后第1天，右下肢运动功能BBB评分为(2.90±4.30)分，n=5；损伤术后15d，BBB评分为(12.80±2.00)分，n=5。

(2)术后发现右下肢脚掌被咬伤比例为26.32％，n=19。

五、结果分析

(1)采用本方法可有效制备出树鼩T10脊髓半横断损伤模型。

(2)树鼩T10脊髓半横断损伤后可能会由于下肢痛觉敏感而导致自残咬伤下肢脚掌。

六、经验与体会

(1)树鼩体型较小，皮肤菲薄，损伤术后保暖及预防压疮显得尤为重要，措施得当可有效降低术后动物死亡率。

(2)树鼩脊髓损伤术后保持饲养间良好的通风及保暖，保持室内一定的湿度(40％～60％)，按时人工挤尿，保持笼舍卫生，可有效提高动物的存活率。