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实验方法

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)

2019年11月18日 浏览量: 评论(0) 来源:《常见人类疾病动物模型的制备方法》 作者:秦川 责任编辑:yjcadmin

1油酸法致ARDS

【操作步骤】取体重2~3kg的家兔,将动物背位固定,2%普鲁卡因局部麻醉,分离一侧颈总动脉以备取血用。观察动物一般状态,着重观察呼吸运动、舌黏膜颜色,并记录呼吸频率。由颈总动脉取血1ml(注射针管预先用20mg%肝素盐水冲洗),用微量血气分析仪测定PaO2、PCO2、pH,用结核菌素注射器从耳缘静脉注射油酸,剂量为0.08ml/kg注射后除观察呼吸频率、呼吸运动等一般变化外,分别于30、60、90、120min时取血1ml,重复测定血气变化和肺泡一动脉氧分压差(A-aDO2)等指标,与注射油酸前相比较。注射油酸后3h将动物放血处死,开胸取肺,用生理盐水冲洗其表面血液,并用滤纸吸去表面水分,然后在普通药物天平上称重,计算肺系数。肉眼观察肺组织大体变化后,将标本用10%中性福尔马林固定液固定,常规病理切片镜检。

【注意事项】实验必须保证油酸准确注入血管内,因油酸总量甚微,如稍有外溢则影响很大。处死动物以放血为好。取肺时应将心肺提起,结扎并离断腔静脉及主动脉,并于气管分叉上1mm处再结扎一线,从上端剪断气管,最后连同心肺血管全部结扎离断,务求准确得出肺重量。如果此模型作实验治疗用,则可根据实验要求延长动物存活时间或调整油酸剂量。

【结果分析】油酸是一种刺激性较强的脂肪酸,静脉注射即可刺激血管收缩,导致肺动脉压升高,同时又可损伤血管内皮细胞,并破坏肺表面活性物质,导致肺泡一毛细血管膜通透性增高,造成肺间质和肺泡水肿。血管内皮细胞损伤,可导致肺小血管内广泛微血栓形成。所有实验动物注射油酸后,有明显吸气性呼吸困难,有的在60min自鼻腔溢出淡红色泡沫样液体,类似临床急性肺水肿。注射油酸后血气突出变化是PaO2明显下降,60~120min时PaO2开始下降30mmHg左右。实验过程中一般可看到初期PCO2值偏低,pH值偏高,后期则相反,可能与机体代谢情况及呼吸频率变化有关,但变化不大。

注射油酸后肺泡与动脉分压差明显加大。A-aDO2正常值在吸空气条件下为100mmHg,差值加大提示肺泡氧弥散入动脉血发生障碍,是诊断ARDS的重要依据。ARDS时因肺水肿、充血、出血等影响通气与血流灌注比率,增加了无效灌注,导致严重低氧血症,这种情况不能单纯用提高吸入氧分数纠正。

家兔正常肺组织呈淡红色,表面光滑,实验兔肺组织呈暗褐色,有点状或片状出血、小灶性坏死,多数动物气管内有粉红色泡沫样液体,肺体积增大。镜检可见部分肺泡呈代偿性扩张,部分肺泡萎陷显示局部不张,肺泡内有水肿液及出血,偶可见有透明膜形成。

2全氟异丁烯致ARDS

【操作步骤】比格犬以3%的戊巴比妥钠进行麻醉,初始剂量为0.85ml/kg,暴露右前肢内侧皮下头静脉,接三通,以后观察期间每2h追加2ml戊巴比妥钠。麻醉后固定,静脉滴注液体,经口气管插管,插尿管留置。右后肢进行右侧股动脉穿刺,接三通和肝素帽,用于定期取血标本和测血气。动物平稳自主呼吸,10~12次/分,混匀室毒气浓度达到要求时开始染毒。在准备染毒前,采5ml血加入标准7ml离心管中,37℃下水浴20min后进行4℃离心,2500转/分,10min,以微量移液器取透亮上清,放入液氮保存。以血气指标来反映肺的功能变化,同时密切观察呼吸变化。观察24h后向静脉注射空气栓子处死动物,取肺等内脏标本固定于10%的福尔马林中,进行病理分析。

【结果分析】染毒后症状逐渐出现,后期表现为典型的ARDS频速浅快呼吸症状。犬双肺大部分严重充血、水肿和不张,其他脏器改变为器官缺氧的表现。

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