抑制血管内皮生长因子（一种与湿性年龄相关性黄斑变性相关的脉络膜新生血管形成的关键因素）是几种已获批准的治疗方法的作用方式，包括阿帕西普，它需要频繁的玻璃体腔内注射以提供临床益处。不遵守给药计划可能导致活动性湿性黄斑变性复发，导致不可逆转的视力损害。基因治疗在一次注射后在视网膜中提供持续的抗血管内皮生长因子水平，可以大大减轻治疗负担，改善视觉效果。ADVM-022是一种编码阿柏西普的腺相关病毒载体，对玻璃体腔内给药和强蛋白表达进行了优化。在这里，我们报告了在非人灵长类动物的激光诱导的脉络膜新生血管模型中，ADVM-022衍生的阿柏西普的长期表达和疗效。 玻璃体内给予ADVM-022的耐受性良好，并导致持续的阿柏西普水平。另外，在激光治疗前13个月给药ADVM-022可以防止发生临床相关的脉络膜新生血管病变，类似于在病变时接受玻璃体内阿柏西普推注（标准护理）的动物。这些结果表明，一次玻璃体内给药ADVM-022可能为湿性黄斑变性提供安全有效的长期治疗选择，并最终改善患者的视觉效果。

 

 

简介：年龄相关性黄斑变性（AMD）是50岁及以上人群最常见的视力损害原因。血管内皮生长因子（VEGFA）在wAMD 及CNV其后遗症的发生发展中起关键作用。因此，它是在疾病治疗中进行治疗干预的关键目标。 三种阻止VEGFA诱导的新生血管形成的重组抗VEGFA蛋白疗法（雷珠单抗，贝伐珠单抗，阿柏西普）彻底改变了wAMD的治疗方法，并已成为护理标准。尽管基于蛋白质的抗VEGFA疗法有效，但其使用的一个主要缺点是需要每4至8周进行一次慢性玻璃体腔内（IVT）注射，除了治疗费用外，还涉及频繁的就医、注射不适给亲属和看护者带来后勤负担。因此，wAMD的长期随访显示，平均给药频率低于推荐注射频率的一半，这会导致疾病进展和视力下降。相反，接受定期和更频繁的抗VEGFA治疗的患者显示视力显著改善。

 

结果：ADVM-022玻璃体液中阿柏西普的表达：在NHPs中评价了ADVM-022在IVT注射后持续传递和药理学相关水平的阿柏西普的能力。7只成年猴接受双侧50毫升IVT注射，每只眼睛注射2×1012病毒基因组（vg）或ADVM-022。尽管高于IVT研究中常用的水平（通常在1010-1011范围内），21项先前的AAV2.7m8载体的试验研究表明，在该剂量下，该载体具有良好的耐受性。另7只猴接受50μL配方缓冲液的双侧注射（载体组）。为了评估表达水平，根据表2所示的程序对玻璃体房进行取样，并用游离（未结合）阿柏西普特异性ELISA进行分析。在对照组的玻璃体液中未检测到阿柏西普蛋白。在ADVM-022治疗的动物中，所有动物的玻璃体阿柏西普水平在3到9个月之间都很高（所有动物和时间点的平均水平为3.5±1.9μg/mL），尽管在第7到9个月之间所有动物都有轻微的下降，可能反映了分析的可变性。与ADVM-022治疗的其他动物相比，一只动物（A255）的双眼表达非常高，在整个时间过程中平均表达水平为7.5±0.95μg/mL。有趣的是，一只动物（动物A055）的右眼随着时间的推移，玻璃体阿柏西普水平逐渐下降（从3个月时的2.2μg/mL下降到16个月时的0.87μg/mL），而左眼的蛋白质水平在整个研究过程中保持相对稳定。激光光凝不影响ADVM-022治疗动物的阿柏西普蛋白水平；激光治疗前（9个月）和激光治疗后（15.5个月）的阿柏西普水平无明显差异。在所有动物的视网膜和脉络膜组织（wAMD新生血管的部位）中也检测到了阿柏西普的稳定水平，与在玻璃体中发现的水平一致。在以2×1012 vg /眼施用ADVM-022七个月之后，在房水中检测到较低的阿柏西普水平。

 

ADVM-022的安全性和耐受性：常规的临床观察，包括体重和食物消耗，与IVT注射2×1012vg/眼ADVM-022相一致，耐受性良好，耐受性良好。没有任何临床迹象显示ADVM-022相关的全身效应。为了评价IVT注射ADVM-022后的眼部安全性和耐受性，在给药前和给药后12.5个月（激光治疗前不久）的不同时间点，用裂隙灯生物显微镜和眼底镜对ADVM-022和载体对照组的7只动物进行了眼部评估。对照组动物眼科检查结果仅限于在激光治疗前12.5个月的观察期内，14只眼中有4只眼出现纤维蛋白。在用ADVM-022治疗的动物中观察到眼科效应，包括玻璃体细胞浸润（轻度至中度）、角质沉淀物（轻度至中度）和偶发性晶状体囊沉淀物（轻度至中度）。此外，研究早期（给药后6个月内）观察到白细胞和一些色素性角质沉淀物，后期色素性角质沉淀物增多。角质沉淀物严重程度评分为轻度至中度，在研究期间持续存在，设施兽医和眼科医师认为不具有临床意义。ADVM-022治疗动物的玻璃体细胞反应从无到中度不等，轻度到中度评分的患眼数量在1个月时达到高峰，之后在没有类固醇治疗的情况下下降。0.5个月后发现晶状体囊沉着，但很快消失。在12.5个月的研究期间，没有发现房水闪辉或玻璃体混浊，除了在12.5个月时在一只眼睛中观察到1级+玻璃体混浊。

 

在给药后0.5个月、1个月、3个月、6个月、9个月和12.5个月用眼压计测量眼压。对照组赋形剂治疗后眼压保持正常。ADVM-022治疗组14只眼中有4只眼的眼压暂时降低。在给药后0.5个月出现严重前房反应的动物眼中观察到这种眼压降低。在0.5个月达到最低点后，在没有抗炎治疗的情况下，眼压在1个月时改善到正常水平，3个月后恢复到基线水平，在研究期间保持不变。在糖尿病视网膜病变早期治疗研究的网格区域，包括中央凹区域，用光谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）评估视网膜的平均厚度和体积。IVT注射ADVM-022后12.5个月，视网膜厚度和体积没有变化，表明在观察期内没有明显的视网膜水肿，持续暴露于动物体内也没有引起严重的视网膜结构退行性改变。此外，眼底镜检查（基线：0.5、1、3、6、9和12.5个月）和荧光素血管造影（基线：3、6、9和12.5个月）没有发现视网膜形态、视神经乳头或血管完整性的变化。

 

ADVM-022在激光诱导CNV模型中的长期疗效：最初，当ADVM-022在激光激发前56天通过IVT注射给药时，在短期激光诱导CNV研究中评估ADVM-022的疗效。这项研究发现激光治疗后立即给药，ADVM-022在抑制激光诱导的渗出性病变方面与阿柏西普一样有效。随后的一项长期研究探讨了在CNV模型中ADVM-022疗效的持久性。随机选择4个接受ADVM-022治疗的NHPs和4个13个月前接受赋形剂治疗的NHPs，在视网膜黄斑周围区域进行激光光凝，以诱发CNV病变。另一组4只未成年动物在光凝时接受1.2mg市售阿柏西普重组蛋白的IVT注射作为阳性对照。注射的阿柏西普重组蛋白量与患者的临床剂量相对应，但与猴眼的玻璃体体积（人类玻璃体体积的一半）成比例调整。疗效评估为临床相关的IV级渗出性病变（定义为早期或中期高荧光，晚期荧光素渗漏超出激光光斑边界）。先前的NHP研究已经证明，IV级病变的发生率，作为完整血管造影分级范围内的一个组成部分，是对IVT注射标准抗血管生成药物反应的有力代表。本研究在激光照射后2周和4周用荧光素血管造影对IV级病变进行评估，并通过OCT成像产生的CNV复合物的横截面测量来支持结论。虽然每只眼睛都有9个激光点，但并非所有的病变都可以评估，因为出血掩盖了病变部位（激光光凝术后常见的情况）或是由于瞳孔扩张不足导致的能见度差。在激光手术过程中，两只眼视网膜下大出血，使得激光光凝在四个邻近病变中不可行。与该模型一致，赋形剂组在激光治疗后2周和4周的IV级病变发生率分别为43%和40%。在激光治疗后2周和4周，阿柏西普重组蛋白对照组的IV级病变发生率显著低于赋形剂治疗组。相比之下，接受ADVM-022治疗的动物在激光治疗后2周和4周的IV级病变发生率也明显低于赋形剂动物。ADVM-022组与阿柏西普重组蛋白组的IV级病变发生率无统计学差异。

 

结论：本文的结果首次证明了阿柏西普的长期稳定表达和疗效的临床前证据，阿柏西普是通过IVT施用基因治疗载体为wAMD批准的抗VEGFA蛋白疗法。在本文报道的NHP的玻璃体和视网膜组织中发现的阿柏西普水平与在兔子推注阿柏西普后不久的蛋白水平一致。这种持续表达和IVT给药途径，不需要特殊的手术技巧，绕过了视网膜下注射的风险，是解决目前wAMD蛋白治疗相关依从性挑战的重要因素。ADVM-022结合了AAV2.7m8衣壳（在IVT给药后可改善视网膜转导），与以前和正在进行的基因治疗方法相比，它具有重要的优势。此处报道的可靠药理学和药代动力学结果支持在wAMD患者中启动ADVM-022临床试验。