目的:探讨核转录因子TRB､RXR和激动剂T4对长爪沙鼠Cip4基因表达的调控作用｡

方法:合成长爪沙鼠Cip4基因启动子区序列,构建报告载体pGL3-Cip4;将转录因子TRB､RXR克隆到pcDNA3.1表达载体上｡将pGL3-Cip4,pcDNA3.1-TRB,pcDNA3.1-RXR和pRL-TK(参照质粒)载体共转染到HEK-293细胞,构建Cip4基因的荧光素酶双报告系统｡观察质粒用量､TRB的激动剂甲状腺素T4等处理对转录活性的影响｡

结果:以长爪沙鼠Cip4启动子区为启动序列的双荧光素酶报告基因系统在(启动子+转录因子):pRL-TK=20∶1､总质粒量为2μg时转染效率最高,并具有最高的荧光素酶活性｡检测结果显示,仅加入TRB不改变Cip4的转录水平(P>0.05),仅加入RXR可以增加Cip4的转录水平(P<0.05),RXR与T4共同作用可上调Cip4的转录水平(P<0.001)｡TRB与T4共同作用可下调Cip4活性(P<0.05)｡RXR､TRB､T4共存时,Cip4的转录水平显著下调(P<0.01)｡

结论:本研究证实了T4､TRB及RXR共调控长爪沙鼠Cip4基因的转录,模拟了配体激活型转录因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的转录,同时证实了Cip4的转录活化与RXR信号通路密切相关,为揭示甲状腺素在人类NAFLD中的作用机制奠定了基础｡本报告基因系统可用于配体激活型转录因子调控Cip4基因表达的机理分析及相关药物的筛选｡

全文阅读：基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控