1 阳离子化牛血清白蛋白法家兔模型

【操作步骤】选用雄性大耳白家兔，体重为2.5kg左右，普通饲料适应性喂养，选用尿蛋白定性测试结果阴性兔进行实验。按照 Border方法，牛血清白蛋白(BSA)用碳化二亚胺改变蛋白质的羧基端，使其等电点(pI)提高到8.6以上，处理后的BSA即为阳离子化BSA(C-BSA)。将其溶液透析冷冻干燥，置于－40℃冰箱保存备用，使用前溶于0.15mol/L磷酸盐缓冲液中。每只兔耳静脉注射大肠杆菌内毒素1μg和C-BSA 1mg作为预免疫；预免疫1周后，每日每只兔耳静脉注射C-BSA 25mg正式免疫；正常对照组静脉注射等量的生理盐水，至第8周末结束。

【结果分析】肾小球明显肿胀，球内细胞数显著增多，肾小球基底膜(GBM)明显增厚，过碘酸六亚甲基四胺银染色法(PASM)、 HE和Masson染色可见GBM钉突形成及上皮下沉积物，大多数动物有程度不等的新月体形成，部分肾小球萎缩。透射电镜观察：上皮下大量电子致密物沉积，GBM显著增厚，上皮细胞足突广泛融合、变平或消失，内皮细胞肿胀。免疫荧光观察：荧光强度明显增强，IgG沿毛细血管壁呈粗大颗粒状弥漫沉积。

2 阳离子化牛血清白蛋白法小鼠模型

【操作步骤】选用纯系BALB/c小鼠，体重为20g左右，雌雄对半。弗氏不完全佐剂预免1周后随机分组，隔日子尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA，10mg/ml)，每只2mg，连续注射4周；对照组全程尾静脉注射生理盐水，每只0.2ml。实验3周起，每周每组分别做2次尿蛋白定性实验，4周末取肾皮质分别做免疫荧光、光镜[HE、PASM、Masson、磷钨酸苏木素染色液(PTAH)]、电镜观察。

【结果分析】膜性肾小球肾炎是引起成人肾病综合征最常见的原因，用该法复制的小鼠膜性肾小球肾炎模型，制作过程简便，病变稳定而典型，病理变化较为一致，接近或模拟临床患者实际病变，是一种较理想的肾炎发病机制研究的动物模型。肾功能尿蛋白定性试验显示小鼠自第3周起出现蛋白尿。实验第4周末处死小鼠取肾时，可见肾脏肿大，包膜紧张，色苍白。与正常组相比，病理组小鼠肾皮质免疫荧光观察显示IgG沿肾小球毛细血管壁呈颗粒状沉积；病理组小鼠肾皮质石蜡切片HE染色及PASM、Masson、 PTAH特殊染色见肾小球呈典型膜性病变，毛细血管壁弥漫增厚，其上有钉突、红染沉积物形成，部分肾小球毛细血管袢间或球囊内有少量渗出物；电镜观察显示病理组小鼠肾小球GBM弥漫增厚，上皮细胞肿胀，足突融合变平或消失，上皮下可见团块状电子致密沉积物。

3 Tamm-Horsfall蛋白(THP)诱导肾小管间质性肾炎

【操作步骤】(1)在正常成年男性新鲜中段尿中加入氯化钠，使浓度为0.58mol/L，置4℃沉淀48h，沉淀经透析形成无色透明的黏性液体，冻干后低温保存。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及1％琼脂糖双向免疫扩散实验对其进行鉴定为THP。(2)雄性 Wistar大鼠，体重180～200g，随机分组。将250μg/ml的THP溶液与等量弗氏完全佐剂充分混合后，在动物双侧腋下和足底皮下多点注射，每只1ml，共1次。对照组给予去除THP尿液与弗氏完全佐剂的混合液，注射部位及剂量同上。预免疫1周后，用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，经右背部脊柱旁切口暴露右肾，实验组用0.1ml THP溶液(125μg/ml)，在肾上、下极多点注射，局部压迫止血后缝合。对照组采用去除THP的尿液，方法同前。

【结果分析】近年临床和实验研究证实，在膀胱输尿管反流和尿路梗阻等病理状态下，Tamm-Horsfall蛋白可通过破损的肾小管进入肾间质，激发自身免疫反应而引起肾小管间质性肾炎(TIN)。

于术后第14d取肾组织进行病理观察，光镜下主要表现为注射部位的局灶性间质炎症细胞浸润，以单核、淋巴细胞为绝大多数，炎症灶中心肾小管结构破坏消失，部分肾小管完全被炎症细胞包围，小管细胞可见浊肿及空泡变性。于术后第7、14d剪尾取血，用免疫荧光双抗体、双标记方法处理后，通过流式细胞仪发现T细胞 CD4、CD8、CD25、Ia抗原表达有不同程度的增加；在肾病灶局部浸润淋巴细胞中，CD8+细胞占大多数。

4 氯化汞肾病

【操作步骤】选用成年Brown-Norway(BN)大鼠，用0.1％氯化汞水溶液作足垫皮下注射(1mg/kg体重)，每周3次，共8周。对照组接受同体积pH3.8的注射用水(0.1mol/L盐酸溶液配制)注射。

【结果分析】注射氯化汞2周内，免疫荧光显示IgG呈颗粒样沿肾小球毛细血管壁分布，电镜下出现上皮下电子致密物。4～8周绝大多数肾小球GBM呈弥漫性或局灶性增厚。

一系列研究证实氯化汞诱发抗GBM抗体所介导的肾小球疾病，受试动物的肾洗脱液或血清转输给正常大鼠可导致上述相同的病理改变，用ELISA方法检查注射氯化汞动物血清可检出抗层粘连蛋白、抗胶原Ⅳ、抗硫酸类肝素及抗纤连蛋白抗体等。