五指山小型猪的外貌特征及种质特异性
(一)WZSP外貌特征
体型小,头小而长,耳小而直立,嘴长尖,嘴筒直或微弯,型似老鼠,所以当地素称“老鼠猪”,胸窄,腰背平直,腹部不下垂,四肢细短,呈白色、蹄踵长、稍前倾,全身被毛为黑色,额部有白三角或流星,腹部和四肢内侧为白色,毛色一致、黑白体色分布均匀而有规律(图1-27~图1-30)。6月龄成年猪体重15kg,24月龄成年母猪体重35kg,乳头数10~12个,窝产仔6~8头,初生重0.3~0.4kg。
(二)WZSP遗传纯度高、与其他品种猪遗传背景差异甚大
见第一章第二节一二一(一)内容。
(三)家系分析证明近交提高了遗传纯合度。WZSP具有耐近交繁育的特性
见第一章第二节一二一(一)内容。
(四)WZSP生长激素位点有特异性表达
生长激素在动物的生长发育过程中起着十分重要的调控作用,为此,对WZSP的生长激素位点进行了初步的研究。以猪的生长激素(GH)cDNA为探针,利用BarnHⅠ、Dral、EcoRⅤ、HindⅢ、Kpnl、PstⅠ、SacⅠ、Smal、XbaⅠ等酶切基因组DNA,首先对4头WZSP和4头长白猪进行了RFLP分析,结果发现:这两个猪种在EcoRⅠ、EcoRⅤ和PstⅠ酶切杂交图谱上存在明显的差异,而在其他的酶切杂交图谱上未发现差异。然后又分析了从原产地引种的公、母猪及其部分后代在生长激素位点上的EcoRⅠ、EcoRⅤ和PstⅠ酶切杂交图谱。在两头原始引种原种的WZSP中,母猪出现一条带色很深的EcoRⅠ杂交带(EIs),其分子量约2.6kb,而另一头公猪中的这条带很浅(EIw);当用 EcoRV酶切时,公猪有一条约2.79kb的深色带(EVs)而母猪的这条色带很浅(EIw);当用PstⅠ酶切时,母猪有一条约1.27kb的深色带(Ps),而公猪的这条色带很浅(Pw)。在含深色带的WZSP与浅色带的WZSP或枫泾猪的交配后代中,深色带出现在约50%的个体。此后,又分析了8头长白猪和8头枫泾猪在生长激素位点上的EcoRⅠ、EcoRⅤ和PstⅠ酶切图谱。在所检测的8头长白猪中,既未发现EIs带,也未发现BIw带,但都有BVw和Pw带;在所检测的8头枫泾猪中,上述深色带都未出现,而BIw出现于3/5的个体中,BVw出现在于,Pw出现于6/8的个体中(图1-31、图1-32)。有关WZSP在GH位点上的、独有的深色带所代表的等位基因的结构和功能尚待进一步研究。
为此,利用国际合作机会,在美国耶鲁大学、佐治亚医学院对WZSP生长激素基因序列及其结构分别进行了三次测定,其特异性均取得了相同结果。将WZSP的生长激素基因序列与Vize发表的普通猪的生长激素基因序列进行比较。得出WZSP与其他猪等之间的不同处。即:全长为1883bp,①在5'及3'端部分测翼序列,两者只有在5'端有一个碱基不同;②在内含子区,WZSP在第3内含子有14个碱基的缺失及第4内含子中有6个碱基缺位,其他还有少数个别碱基的改变;③在外显子区,发现共有3个碱基发生变化,它们是第2外显子中的第373位碱基G变为A,相应密码子由CGG变为CAG,氨基酸由带正电荷的极性氨基酸Arg变为不带电荷的极性氨基酸Gln,第5外显子中的第1574位碱基A变为G,相应密码子由GAC变为GGC,氨基酸由带负电荷的极性氨基酸Asp变为不带电荷的极性氨基酸Gly。将WZSP生长激素基因组基因编码的生长激素氨基酸残基序列与人、牛、普通猪、鸡、海龟的序列进行比较,发现WZSP生长激素变异的3个氨基酸残基中后2位于生长激素氨基酸序列的高度保守区。表明,WZSP生长激素基因序列与普通猪生长激素基因序列比较,发生了一定程度的变化,特别是第3内含子的14个碱基的丢失及高度保守区的两个不同性质氨基酸残基间的改变,对WZSP生长激素基因的结构及基因表达都可能会产生一定的影响。为后来进一步深入研究其矮小型指明方向。
(五)WZSP猪具有特异性遗传标记
在WZSP猪特异性遗传标记研究中,用合成2个3'引向和5个长10nt的5'随机引物,对长白猪、 WZSP和枫泾猪三品种的肝组织总RNA进行DDRT-PCR分析,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳共产生24条多态性cDNA片段。在其扩增、标记和克隆后,经Northern杂交鉴定,证明一个长221bp的片段为WZSP特有的,以克隆的特异性片段,调出其全基因进行分析为探索三品种同表型差异的分子基础提供一条线索,为后来进一步研究WZSP的遗传标记奠定了基础和信心。
(六)WZSP基因组不含MHSn基因
依据猪的RYRI/CRC cDNA 1843位的C→T突变,是目前所发现的唯一决定猪MHS的变异, MHS基因(MHSn)及RYRI/CRC 1843 T等位基因;MHS抗性基因(MHSn)即RYRI/CRC 1843 C等位基因。猪RYRI/CRC cDNA 1843位的C→T突变删除了一个Hhal识别位点,产生了一个Bsr HKAI酶切位点。根据以上规律,参考已知的猪CRC/RYRI基因序列和国外相关研究的成果,设计了一对特异扩增引物,特异扩增包含猪CRC/RYRI cDNA 1843位点在内的660bp片段,然后用Hhal或BsiKAI限制性内切酶消化PCR扩增产物,即可得到MHS座位三种基因型的特征性电泳带型。其特异性扩增引物为:
5'-TCCAGTTTGCCACCAGGTCCTACCA-3'-Forward primer.
Reverse primer:5'-ATTCAAAGGAGGAGTCTCTTGAG-3'
并按照Sensabaugh,G.等(1989)从耳皮肤的DNA提取方法和浓度测定,按常规方法进行PCR操作过程、电泳。通过对44头WZSP和其他品种猪样品的分析,在WZSP群体中未发现MHSn基因;而二花脸猪和民猪中均存在MHSn基因,其MHS杂合子频率分别为1.15%和31.25%,MHSn基因频率分别为0.57%和15.63%,而引进品种皮特兰和比系长白猪具有更高的MHSn基因频率,分别为94.40%和94.32%,丹系长白猪和杜洛克猪MHSn基因频率较低,分别为3.57%和4%,这一结果同利用氟烷测定法得到了一致的结果。表明WZSP不含有MHSn基因,不会发生应激综合征,是实验动物的良好素材,同时也为其肉质优良提供了理论依据。
上述初步研究结果,为后来进一步深入研究其近交特性、建立品种(品系)的遗传标记和遗传鉴定标准奠定了基础和方向。