3  讨论

 

从COVID-19疫情发生至今，国家卫生健康委联合国家中医药管理局已经颁布了6版《关于新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》，方案中将抗艾滋病药物“克立芝”纳入治疗药物名单，虽有一定疗效，但缺乏针对性。近来有报道称瑞德西韦（Remdesivir）能有效抵御病毒感染，预防和治疗冠状病毒引发的呼吸症状和肺部损伤[20]，但瑞德西韦的COVID-19三期临床试验还在进行当中，并不能短时间内广泛用于临床。中医药防治瘟疫具有悠久历史，中医“治未病”的早期干预、综合治疗的整体调节作用对防控突发流行性传染病具有明显优势。新中国成立以来，在乙脑、流脑、出血热、甲流等流行传染性疾病防治中，中医药发挥了重要作用，许多有效方法至今临床广泛应用。2003年，中医药治疗SARS的安全性和有效性得到了政府和世界卫生组织的肯定。而目前，针对COVID-19的治疗尚无有效药物，西医主要是支持和对症治疗，中医药治疗瘟疫不是单纯与病毒对抗，而是注重驱邪与扶正并举，使邪有出路，正气得复。根据COVID-19的症状表现，李建生等[21]认为COVID-19属于中医学“湿毒疫”范畴，主要病因为湿邪疫毒，首先犯肺，病位在肺、由气及血，时及脾胃，病机特点为“湿、热、毒、瘀、虚”。

 

在网络药理学研究部分，发现处方中矿物药石膏在TCMSP数据库中未收录其成分，若换成其他数据库，存在数据库收载标准和算法不同的问题，故删除了此药物。查阅文献报道[22]，生石膏主要治疗外感热病所致的高热烦渴，肺经实热导致的肺热咳喘，而石膏的主要成分为硫酸钙，且肺热咳喘是COVID-19的主要症状之一。因此，将硫酸钙与SARS-CoV-2 3CL水解酶进行分子对接，结果显示其结合能为−4.60 kJ/mol，大于−5.0 kJ/mol，因此硫酸钙未纳入抗病毒颗粒治疗COVID-19的核心活性化合物。

 

通过网络药理学分析可知，抗病毒颗粒中评分最高的10个化合物中有8个属于黄酮类成分，β-谷甾醇和豆甾醇属于植物甾醇。将这些核心化合物及目前临床推荐使用的化学药与SARS-CoV-23CL水解酶进行分子对接对比研究，发现抗病毒颗粒中核心活性化合物与SARS-CoV-2 3CL水解酶的结合能与化学药相近甚至优于化学药，尤其是比枯枯灵、木犀草素和槲皮素均低于瑞德西韦、利巴韦林和利托那韦等的结合能。根据文献报道，SARS-CoV-2与SARS-CoV病毒感染的途径均通过其表达的S-蛋白与人体内ACE2的结合[23]，导致病毒侵入机体而致病。因此本研究又将比枯枯灵、木犀草素、槲皮素、瑞德西韦、利巴韦林和利托那韦与ACE2进行分子对接，结果显示比枯枯灵、木犀草素和槲皮素的结合能分别为−41.42、−36.82、−36.40 kJ/mol，瑞德西韦、利巴韦林和利托那韦的结合能分别为−32.22、−27.20、−34.73 kJ/mol，抗病毒颗粒核心化合物结合能均低于化学药的结合能。一般认为配体与受体结合的构象稳定时能量越低，发生的作用可能性越大，结果表明通过网络药理学和分子对接技术筛选出来的核心化合物与COVID-19推荐用药与可能靶点的亲和力相似，说明抗病毒颗粒对于治疗COVID-19应该有较好的疗效，比枯枯灵、木犀草素、槲皮素等核心化合物可能是抗病毒颗粒治疗COVID-19的潜在物质基础。此外，网络药理学分析排名前3位的靶点分别是PTGS2、HSP90AB1和PTGS1，均是比枯枯灵、木犀草素和槲皮素的作用靶点。KEGG分析得到的与PTGS2、HSP90AB1和PTGS1有关的且排名前10的通路有4条，分别是癌症通路、前列腺癌通路、TNF信号通路和小细胞肺癌通路。文献报道表明[24-26]，PTGS2、HSP90AB1、TNF和小细胞肺癌通路等在影响RNA病毒的复制以及在治疗肺炎的过程中起关键作用，利用网络药理学预测抗病毒颗粒治疗COVID-19的潜在物质基础具有一定可靠性。根据研究结果，抗病毒颗粒是否通过PTGS2、HSP90AB1、PTGS1等靶点作用于癌症通路、前列腺癌通路、TNF信号通路和小细胞肺癌通路，从而起到抗COVID-19的作用需要进一步验证研究。

 

本研究通过网络药理学和分子对接技术对抗病毒颗粒治疗COVID-19的潜在物质基础进行了研究，研究主要是通过查阅已有药材成分从而进行相关分析。而中成药中每种药材的比例不同，且制剂工艺的不同会导致有效成分溶出的差异。抗病毒颗粒主要采用沸水提取，乙醇沉淀除杂的制备工艺，制剂中的成分大多是既溶于水，又溶于醇的成分，研究筛选出来的主要成分是比枯枯灵、木犀草素和槲皮素。通过查阅资料，这些成分的极性适中，能溶解于抗病毒颗粒的制备工艺参数中所用的溶媒，故本研究基于药材成分的分析成药，有一定的依据。当然，由于个别成分含量与制剂中药材处方量和极性有一定的关系，可能在成药中含量不高，甚至没有，因此本课题组后续将根据研究结果，采用现代分析方法对抗病毒颗粒中的成分进行定性定量测定，以期深入研究抗病毒颗粒治疗COVID-19的潜在物质基础。

 

目前中医药对于COVID-19的治疗起到了重要作用，在湖北确诊病例救治中，中医药参与度在75%以上，在全国其他地区的比例达到90%以上。2月7日，国家卫生健康委和国家中医药管理局联合发布通知将《清肺排毒汤》推荐用于中西医结合救治新冠肺炎。2月14日，湖北省政府召开发布会，邀请相关专家，介绍中医药参与COVID-19疫情防控的有关情况。黄璐琦院士提到采用中西医联合救治新型冠状病毒肺炎能提高救治的质量，减少死亡，减少重症变成危重症的发生率。本研究基于中药在治疗COVID-19临床有效性，以抗病毒颗粒为代表，对其潜在药效成分进行探索，对其靶标、通路进行研究，以期为临床应用提供一定的依据。

综上所述，本研究利用网络药理学和分子对接技术对抗病毒颗粒治疗COVID-19的潜在物质基础进行了探索性研究，通过与目前临床推荐使用的化学药进行比较，发现抗病毒颗粒有潜在的治疗作用。课题组在后续研究中也将在此基础之上，对抗病毒颗粒的生产和质量控制过程进行有重点、针对性的控制，以期为抗病毒颗粒治疗COVID-19提供理论和实验依据。