目的    探究豚鼠对口蹄疫病毒(FMDV)抗性的遗传学和免疫学机制。 阐明 FMDV 假病毒感染的细胞用于研究 FMDV 发病机制的可行性。 

方法    通过含有 FMDV-VP1 片段的慢病毒载体侵染豚鼠原代肾细胞,构建 FMDV 假病毒感染的靶细胞。 分离 FMDV 易感性(Zmu-1:DHP 品系)和抵抗性(英国种)的两个品系豚鼠外周血淋巴细胞(PBLC,未经抗原处理),与假病毒侵染的靶细胞共培养,用细胞毒性实验测定 PBLC 的杀伤率,并使用 ELISA 检测细胞培养上清中细胞因子的含量。 通过流式细胞分选测定两个品系豚鼠 PBLC 中 CD3+ / CD4+及 CD3+ / CD8+细胞的比例。 

结果    对于两个品系豚鼠而言,实验组 PBLC 的细胞毒性均显著大于各自的对照组( P < 0. 01);抵抗性品系豚鼠 PBLC 对靶细胞的细胞毒性显著大于易感性品系豚鼠(P < 0. 01);抵抗性品系豚鼠 PBLC 分泌的细胞杀伤因子 PF、GRA、GRB 及细胞表面 Fas 表达量显著大于易感性品系豚鼠( P < 0. 01) ,但分泌的 FasL 表达量无显著差异(P > 0. 05) ;抵抗性品系豚鼠 PBLC 分泌的细胞因子 IFN-γ、TNF-α、IL-2 及 IL-12 含量显著大于易感品系(P < 0. 05) ,细胞表面 MHC I 及 MHC II 差异不显著(P > 0. 05) ;含有 FMDV-VP1 片段的慢病毒载体侵染豚鼠原代肾细胞,可使细胞表面表达 FMDV-VP1 蛋白;抵抗性品系豚鼠 PBLC 中 CD4+细胞数量显著少于易感性品系(P < 0. 05) ,抵抗性品系豚鼠 CD8+细胞数量显著高于易感性品系(P < 0. 05) 。

结论    FMDV-VP1 片段显著激发了效应细胞的免疫反应,增强效应细胞对靶细胞的细胞毒性;抵抗性豚鼠 PBLC 对 FMDV 感染细胞具有较强的天然细胞毒性;效应细胞对靶细胞产生细胞毒性的过程中,效应细胞分泌的细胞免疫因子参与了相关过程;通过含有 FMDV-VP1 片段的慢病毒载体侵染豚鼠原代肾细胞,构建 FMDV 假病毒感染的靶细胞有效 模拟 FMDV 对靶细胞的感染,可提升后续研究工作的安全性。 不同品系豚鼠的遗传特性决定了其对 FMDV 易感性的差异。

阅读原文：不同 FMDV 易感性豚鼠 PBLC 对模拟 FMDV感染细胞的杀伤作用.pdf