目的    利用透射电镜观察中药复方健耳剂干预小鼠老年性耳蜗外毛细胞( outer hair cell,OHC)、螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)凋亡作用;共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察复方健耳剂对耳蜗 SGN 的特异性核抗原蛋白(NeuN)、脑源性神经营养因子(BDNF)定位表达影响作用,探讨其作用机 制。 

方法    选择 1 月龄 C57BL/ 6J 小鼠 22 只并随机分为两组,其中 11 只小鼠每日饮用自来水直到 7 个月作为老年性耳蜗退变对照组(简称 7 月龄对照组);11 只小鼠每日饮用复方健耳剂 1. 83 g / ( kg·d)直到 7 个月作为中药干预组(简称 7 月龄中药组)。 所有动物期满取出耳蜗,制备石蜡包埋切片,在透射电镜下,重点选择观察 7 月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的 OHC 以及对应部位的 SGN 超微结构变化,同时与 7 月龄中药组相同部位的 OHC 和 SGN 进行对照。 利用激光共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察 NeuN 与 BDNF 在 SGN 定位表达,并进行统计分析。 

结果    7 月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的 OHC 以及对应部位的 SGN,胞体萎缩,胞核不整,核染色 质聚集成团、边集, 纹理结构模糊,电子密度高,尤其是 SGN 大小形态不一,数量明显减少,甚至核染色质溶解,形成空泡,或解体缺如等,呈现严重凋亡状况。 而 7 月龄中药组耳蜗底回 OHC 或 SGN 凋亡状况不明显,细胞形态结构较完整,数量较多,核染色质分布较均匀,纹理结构清晰,电子密度低,仅个别胞核溶解,形成空泡。 与 7 月龄对照组比较,7 月龄中药组耳蜗底回 SGN 中的 NeuN 与 BDNF 定位表达密度较高,数量较多( P < 0. 05)。 

结论    耳蜗 OHC 或 SGN细胞核超微结构改变、NeuN 表达减少是老年性耳蜗神经细胞凋亡的重要特征;同期 SGN 凋亡早于OHC;中药复方健耳剂具有明显对抗 OHC 或 SGN 超微结构改变,其对 SGN 中的 NeuN 表达明显增多,提示中药具有明显保护 SGN 作用,与透射电镜观察一致,其作用机制与促进 BDNF 表达,从而发挥系列生物学效应有关。

阅读原文：复方健耳剂对抗老年性耳蜗神经细胞凋亡超微结构观察及上调 NeuN 和 BDNF 定位表达作用.pdf