大鼠肥胖抑制素(Obestatin-rat)放免药盒开发成功
肥胖抑制素是一种胃生长素基因编码的生物活性多肽可以拮抗胃生长素的食欲刺激作用.胃生长素是一种可以诱发食欲的脑肠激素,其生物活性依赖于前体原翻译后的剪切和乙酰化修饰后形成一种具有生物活性的多肽。 obestatin——其中“obe”是拉丁来源的词汇“obese(肥胖)”的缩写,表示大量摄食,而“statin”则表示“抑制”。与胃生长素刺激食欲的作用相反,用肥胖降脂素(肥胖抑制素)处理大鼠后,发现大鼠摄食量和空肠收缩次数减少,体重增加速度变缓。肥胖降脂素(肥胖抑制素)可与孤儿G蛋白受体GPR39结合。由同一个胃生长素基因编码,经过翻译后的不同片断剪切和不同类型的修饰(胃生长素乙酰化修饰; 肥胖降脂素(肥胖抑制素)C末端酰胺化)产生的两个多肽激素对体重调节却起着相反的作用。它们激活的是截然不同的两个受体。
用人工合成的肥胖抑制素(Obestatin-rat)分子量2816.8与TG连接,免疫新西兰兔,获得高效价特异的Obestatin-rat抗血清。采用氯氨T氧化法制备125碘标记Obestatin-rat,经Sephades G-25纯化,竞争性抗原抗体反应采用液相平衡法,4℃温育24小时。经PR试剂分离结合和游离的标记抗原,建立了放射免疫测定法。该法标准曲线范围为0.1-8.1ng/ml。最小检出值0.1 ng/ml, 非特异结合<5%。抗体特异性好,与小分子物质TNF、GM-CSF、ET、CGRP、M-Leptin、Ghrelin125-2000ng/ml没有交叉反应。抗体工作稀释度为1:16000,抗体最大结合率40%;平均回收率98.8%。样品批内变异系数为:cv=5.37%( n=5);批间变异系数为: cv=7.2% (n=5),正常参考值:雄性小鼠1.531±0.164ng/ml(n=9),雌性小鼠3.164±0.805 ng/ml(n=17);雄性大鼠0.877±0.279 ng/ml(n=11)。该法特异、灵敏、简便,可用于鼠类动物实验模型血清和组织匀浆样本的检测。
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