目的 探讨骨肉瘤干细胞(osteosarcoma stem cells, OSCs)来源的外泌体对 T 细胞增殖及分化的影响及其相关作用机制。

方法 采用无血清悬浮培养获得 OSCs,并利用干细胞标志物流式分选技术进行鉴定。 试 剂盒提取骨肉瘤干细胞分泌的外泌体(OSCs-exo),利用透射电镜、粒径分析及 Western blot 实验进行鉴定。 将 OSCs-exo 与 PBMC 进行共培养,CFSE 染色及细胞流式实验检测其对 T 细胞增殖的影响。 Western blot 实验检测 ERK 信号通路中 ERK 蛋白的磷酸化改变。 免疫磁珠分选 CD4+T 细胞,并将其与 OSCs-exo 在不同 CD4+T 细胞亚群诱导分化液中进行共培养,细胞流式实验检测 OSCs-exo 对后者分化的影响。 Western blot 实验检测 STAT 信号通路 中磷酸化 STAT1、STAT3、STAT5 蛋白的表达。

结果 成功分离获得了 OSCs CD133+MG-63,透视电镜、粒径分析及 Western blot 实验结果表明 OSCs-exo 为直径在 30~ 100 nm 的圆形或椭圆形囊泡结构,其高表达外泌体标志性蛋白 CD63、HSP70。 CFSE 染色及细胞流式实验及 Western blot 实验结果显示 OSCs-exo 可能通过抑制 ERK 蛋白磷酸化抑制 CD3+ 、CD4+ 、CD8+T 细胞的增殖,通过抑制磷酸化 STAT1、STAT3 蛋白的表达抑制 CD4+ T 细胞向 Th1、Th17 并促进其向 Th2、Treg 细胞的分化。

结论 骨肉瘤干细胞来源的外泌体能够通过下调 ERK 蛋白的磷酸化抑制 T 细胞 的增殖,并降低磷酸化 STAT1 与 STAT3 蛋白的表达以诱导 CD4+ T 细胞向 Th2、Treg 细胞分化,而抑制其向 Th1、 Th17 的分化,从而下调细胞免疫功能,促进肿瘤的进展。

阅读原文：骨肉瘤干细胞来源外泌体对T细胞增殖及分化的影响.pdf