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国家生物安全法解读｜实验动物管理、意外事故及防范
《中华人民共和国生物安全法》2020年10月17日第十三届全国人民代表大会常务委员会第二十二次会议通过，2021年4月15日起施行。
《中华人民共和国生物安全法》第五章 病原微生物实验室生物安全 第四十七条 病原微生物实验室应当采取措施，加强对实验动物的管理，防止实验动物逃逸，对使用后的实验动物按照国家规定进行无害化处理，实现实验动物可追溯。禁止将使用后的实验动物流入市场。
第九章 法律责任 第七十七条 违反本法规定，将使用后的实验动物流入市场的，由县级以上人民政府科学技术主管部门责令改正，没收违法所得，并处二十万元以上一百万元以下的罚款，违法所得在二十万元以上的，并处违法所得五倍以上十倍以下的罚款；情节严重的，由发证部门吊销相关许可证件。
病原微生物的动物感染实验，是生物安全事故的重要风险防范点。感染的动物携带的病原体在操作过程中可通过空气气溶胶、分泌物、排泄物等感染实验工作人员。
动物感染的操作涉及动物的麻醉、给药、样本采集、安乐死和剖检，鸡胚实验也可归于感染动物的操作，会产生各种意外事故。本文将从意外事故类型，应急预案、事故现场操作要点以及意外事故的预防一一阐述。
1 动物实验意外事故类型
01）刺伤或切割伤 刺伤经常发生在麻醉、给药、采样、鸡胚接种等过程。切割伤经常发生于手术、解剖等过程。
02）抓咬伤 抓咬伤经常发生于：垫料更换、麻醉、体温测定等过程。
03）动物逃逸 常发生于麻醉、垫料更换等过程中。
04）麻醉过量 中大型动物的麻醉过量视为意外事故。
05）鸡胚实验意外
接种鸡胚时的刺伤
收集病毒时的溢洒
运送鸡胚时的跌落
2 动物实验意外事故应急预案
针对可能出现的感染性动物实验意外事故，为保障生物安全实验室安全稳定运转，应制定有效的意外事故处置预案。
发生意外事故处置时处置程序的原则是保护工作人员健康和安全，将对实验室环境和外部环境的污染降到最低。
采取措施的原则是控制扩散，控制传染源，安全处理污染物品和污染场所。
应急预案应包括(不限于）:负责人、组织、应急通讯、报告内容、个体防护和应对程序、应急设备、撤离计划和路线、污染源隔离与消毒灭菌、人员隔离和救治、现场隔离和控制、风险沟通等。
实验室应培训所有人员（包括来访人员）熟悉应急程序、撤离路线和撤离集合地点；每年至少进行一次演习。
3 动物实验意外事故现场处理操作要点
在实验室内出现动物意外事故时，现场处置至关重要，细节上的处理会极大降低实验室污染和人员感染的风险。同时配备必要的急救设备和器材，以备现场处理使用，急救箱的位置：应置于防护区内，组成（包括但不限于）：75%乙醇、碘伏、创可贴、纱布、绷带、剪刀/镊子、医用胶布等。
01） 针刺伤/切割伤和抓咬伤的现场处理
① 立即终止实验，将实验动物放置于密封笼具中。
② 另一位实验人员向受伤人员受伤及全身喷洒75%乙醇，脱去手套（生物安全柜内）
③ 用手挤压局部使血液流出，用清水或洗眼器内的水冲洗伤口。
④ 取出急救箱，对污染的皮肤和伤口用碘伏或者适当消毒剂多次擦拭。
⑤ 对伤口进行适当包扎，戴干净手套后按规定路线撤离退出实验室
⑥ 事故报告
⑦ 医学评价/定点医院救治/隔离等
该类事故现场处理的重点：
① 控制动物
② 清理伤口
02）动物逃逸的现场处理
① 立即停止实验，进行捕杀，原则上人员在未抓获逃逸动物前不得离开动物实验室。
② 如小型啮齿动物逃逸到实验室，则立即用长柄镊子，快速、稳准夹住动物尾根部抓取动物并放入笼盒中。如果动物逃逸迅速、用镊子不易抓取时，则用专用网兜进行抓取。如果动物逃逸到设备下面不易抓取的地方，使用网兜手柄（网兜可拆分为手柄和网兜）小心将动物赶出设备再行抓取。
③ 增加室内换气次数，对动物逃逸路线及动物喷溅出的血液、分泌物用湿的消毒布或纸巾覆盖消毒30分钟后，置于规定的容器内待高压灭菌；并报告值管人员组织二次洗消。
该类事故现场处理的重点：
① 啮齿类动物逃逸较常发生，抓捕应局限于实验室内，切忌慌乱、多次夹取。尽量减少对动物的刺激。
② 原则上逃逸动物未扑杀之前不得退出实验室，避免动物逃逸出实验室进入公共区域，造成更大的公共卫生事件。
03）麻醉过量的现场处理
麻醉过量的表现
轻度：指实验动物呼吸频率明显减慢有轻度的缺氧表现，如舌头由鲜红变暗，但仍然是有规律的自主呼吸。呼吸深度正常，循环系统无明显障碍。血压、心跳正常。
重度：呼吸频率大幅度下降且不规律，时有时无，忽深忽浅，明显的缺氧表现，如舌头发紫，测血中的氧分压和氧饱和度均明显下降，循环系统受影响，如心跳减慢，血压下降。但是，角膜反射存在。
危重：呼吸停止，心跳减慢，且不规律，血压下降，或心跳骤停。
处理方法
① 呼吸极慢、不规则，但心跳正常时：给予人工呼吸-压胸法，适当给予苏醒剂。
② 呼吸停止仍有心跳时：①实施人工呼吸，必要时可使用人工呼吸机或吸氧（吸入气中O2占95％，CO2占5％）；②注射50％葡萄糖液；③给肾上腺素及苏醒剂。用5%碳酸氢钠静脉点滴，纠正酸中毒。
③ 呼吸、心跳均停止时：用强心剂l:10000肾上腺素溶液心内注射。注射呼吸兴奋剂25%尼克刹米，静脉注射或心内注射。注射20mg/mL多巴胺提高血压。用5%碳酸氢钠静脉点滴，纠正酸中毒。
该类事故现场处理的重点：
① 中大型动物易发生麻醉过量。
② 麻醉过量急救时防止抓咬伤。
04）鸡胚实验意外事故处理
接种鸡胚时的刺伤-处理同1“刺伤处理”
收集病毒时的溢洒-处理同“感染性物质溢撒”
运送鸡胚时跌落的处理
① 用吸水纸覆盖住跌落区域，由外向内倾倒含1%有效氯消毒剂，将蛋壳及蛋黄等固体包住后用镊子收集置于规定的容器内待高压灭菌；并报告值管人员组织二次洗消。
② 跌落区域1米半径以内用消毒液倾倒，作用30分钟。
③ 实验人员全身喷洒消毒液后按规定线路退出。
④ 报告值班人员对实验室进行二次洗消。
该类事故现场处理的重点：
① 蛋黄归属于固体物质，需收集后高压。
② 尿囊液较粘稠，消毒的时间要比一般液体长。
③ 消毒剂选择取决于所操作病原，含氯消毒剂为通用消毒剂。
4 防患于未然-动物实验意外事故的预防
01）针刺、切割伤、抓咬伤
① 戴防护手套：防咬伤手套/防割伤手套。
② 使用合适的固定器。
③ 动物麻醉充分后操作。
02）动物逃逸
① 动物麻醉充分后操作。
② 参加动物保定技术培训。
③ 生物安全柜内操作。
④ 笼具确定盖好后放回笼具架；灵长类动物需要配合适的笼锁。
03）麻醉过量
① 使用麻醉剂。
② 少量分次给药。
a)动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施。
b)静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应,当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。做慢性实验时，在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。
③ 配备麻醉急救药：强心剂，呼吸中枢兴奋剂，碳酸氢钠（用于纠正酸中毒），高渗葡萄糖（用于升血压）等。
04）鸡胚实验
鸡胚转运使用运输容器。接种了微生物的鸡胚在实验室内转运时应使用双层硬质不破耐高压包装，以防跌落时喷溅溢撒，将病原微生物局限在包装容器内，便于后续消毒灭菌。
主要参考文献
1.瞿涤，鲍琳琳，秦川. 《动物生物安全实验室操作指南》，科学出版社，北京，2019
2.中国合格评定中心.《生物安全实验室认可与管理基础知识 生物安全三级实验室标准化管理指南》，中国标准出版社，北京，2012
3.T/CALAS 7—2017 《实验动物 动物实验生物安全通用要求》中国实验动物学会团体标准
4.秦川. 《实验室生物安全事故防范和管理》，科学出版社，北京，2017
转载来源：未来实验室学苑
WRITER STORY
范薇，预防兽医学博士，长期从事实验动物微生物、生物安全、动物福利、职业健康的科研、监测及实验动物福利伦理审查工作，先后主持及参与了多项国家标准及北京市地方标准的研究。具有丰富的实验动物微生物寄生虫质量监控、生物安全管理、风险评估及福利伦理个案审查的经验。曾荣获中国实验动物学会科学技术奖“三等奖”；中国实验动物学会科学技术奖“优秀青年人才奖”；“优秀教师”等荣誉。
